内容总结：

讲座介绍外泌体概念、形成与分类，并回顾关键历史进展。系统比较超速离心与试剂盒分离方法，讲解NTA、TEM、Western和流式的鉴定流程及注意事项。覆盖RNA与蛋白内含物分析，包括qPCR、芯片、NGS与小RNA建库步骤。演示外泌体标记与体内/细胞摄取示踪方法，并解答常见问题与提供网络资源。

演讲者：王苗英 博士---赛默飞技术支持专家

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 生命科学研究人员、肿瘤与分子生物学实验人员

[00:00-09:59] 外泌体概念介绍流程: 形成与分类和尺寸范围及注意事项

[10:00-18:59] 历史与应用方法: 里程碑时间线和诊断与治疗示例

[19:00-26:59] 分离方法和选择: 超速离心与试剂盒比较及样本选择

[27:00-34:59] 鉴定方法操作: NTA与TEM和Western及流式步骤

[35:00-42:59] 内含物分析流程: RNA与蛋白分析和NGS及示踪方法

学习目标：

  1. 掌握外泌体的形成机制与分类特点
  2. 理解超速离心与试剂盒分离的优缺点和选择
  3. 学习NTA、TEM、Western与流式的鉴定流程及注意事项
  4. 掌握外泌体RNA的提取、qPCR、芯片与NGS建库方法
  5. 理解外泌体蛋白分析与免疫分选提升纯度的策略
  6. 学习荧光染料标记与细胞摄取示踪的操作步骤

基础概念：

  1. 外泌体（Exosome）: 由内体多囊体与细胞膜融合释放的纳米级膜性囊泡（约30-150 nm）。
  2. 微泡（Microvesicle）: 细胞膜出芽形成的较大囊泡（约100-1000 nm），与外泌体来源不同。
  3. 凋亡小体: 程序性死亡产生的细胞碎片（约200 nm-5 μm），含细胞内容物。
  4. NTA（纳米颗粒跟踪分析）: 通过布朗运动测定颗粒尺寸与浓度的仪器分析方法。
  5. 免疫磁珠分选: 利用抗体与CD9/CD63/CD81结合，磁珠捕获特异外泌体亚群。
  6. 超速离心: 高转速离心分离外泌体，纯度高但耗时与设备要求高。
  7. GPC1标志: 血清外泌体上的GPC1可用于胰腺癌早期诊断。