内容总结：

讲座系统介绍流式细胞术在小颗粒、稀有细胞和全血中的特色应用与优势。涵盖外泌体与微粒的检测方法、门控与标记策略。强调声波聚焦和平顶激光在高流速、低CV下的性能，并展示注射泵绝对计数与无裂解无清洗流程。最后介绍pH依赖荧光染料用于吞噬与抗体内化检测及相关资源。

演讲者：王臻 博士——赛默飞技术支持专家

类型: 技术讲座

难度: 高级

目标受众: 生命科学研究人员、流式细胞术实验人员、医疗检验与药物研发工程师

[00:00-09:59] 入门流程: 流式优势和范围: 样品类型和优势及注意事项

[10:00-18:59] 检测方法: 外泌体间接和直接: 微球捕获和膜染色及门控

[19:00-26:59] 检测流程: 微粒与环境样品: 血小板与尿样和海水样品

[27:00-35:59] 采集方法: 稀有细胞及案例: 信噪比和流速及标记组合

[36:00-44:59] 仪器方法: 聚焦与绝对计数: 声波聚焦和平顶激光及计数

[45:00-49:00] 全血流程: 无裂解无清洗: 红白细胞区分和吞噬检测

学习目标：

  1. 掌握外泌体间接法和直接法的检测流程
  2. 理解亚微米门控与膜/蛋白染色的配合策略
  3. 学习稀有细胞的信噪比控制和高流速采集方法
  4. 掌握注射泵实现绝对计数的操作与验证思路
  5. 理解无裂解无清洗全血流程及红白细胞区分方法
  6. 学习pH依赖荧光染料在吞噬与内化检测中的应用

基础概念：

  1. 流式细胞术: 以多激光和多通道荧光/散射检测生物颗粒的技术
  2. 外泌体（Exosome）: 30-150纳米双层膜囊泡，含遗传信息与表面标志
  3. 亚微米门控: 用100/300/500纳米微球预设FSC/SSC门以定位小颗粒
  4. Annexin V: 结合磷脂酰丝氨酸的探针，在血小板微粒中作阳性标记
  5. 声波聚焦: 采用声学对焦使细胞居中通过，提高高流速下的灵敏度与稳定性
  6. 平顶光斑激光: 均匀能量分布的激光，扩大有效检测区并降低CV值
  7. 绝对计数（注射泵）: 以固定体积与精确流速实现定量计数，无需参照微球
  8. 无裂解无清洗: 直接全血染色并稀释上机的快速流程，降低细胞损失
  9. pH依赖荧光染料: 随pH降低而增强信号的染料，用于吞噬与抗体内化研究