内容总结：

讲座围绕免疫沉淀与免疫共沉淀的原理、流程和常见问题展开。通过钓鱼类比说明IP与共IP区别及用途，并介绍pull-down。重点解析抗体重/轻链干扰、抗体固定与交联、偶联效率匹配及降低背景的洗涤优化。最后比较琼脂糖珠与离心柱、磁珠在分离操作上的优劣与注意事项。

演讲者：赵凯 博士——赛默飞技术应用专家

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 生命科学研究人员、分子生物学实验人员、蛋白质互作研究者

[00:00-06:59] 概念介绍操作: 蛋白互作方法和流程及注意事项

[07:00-12:59] IP与共IP方法: 用途与区别和常见问题

[13:00-18:59] 抗体干扰方法: 重轻链问题及解决方法

[19:00-24:59] 抗体固定流程: 交联与直接偶联及注意事项

[25:00-30:59] 偶联效率方法: Protein A/G匹配和替代方案

[31:00-40:00] 降低背景流程: 预清除和洗涤优化及分离操作

学习目标：

  1. 掌握IP与共IP的原理和流程
  2. 理解抗体重/轻链干扰的成因与解决方法
  3. 掌握交联固定与活化树脂偶联的操作要点
  4. 学习Protein A/G/AG与抗体亚型匹配策略
  5. 掌握预清除与洗涤缓冲优化以降低背景

基础概念：

  1. 免疫沉淀（IP）: 用特异抗体固定在载体上富集目标抗原蛋白。
  2. 免疫共沉淀（Co-IP）: 在富集目标蛋白同时拉下其相互作用伙伴。
  3. Pull-down: 用标签结合物在固相捕获带标签蛋白及复合体。
  4. Protein A/G/AG: 与IgG Fc段结合的载体蛋白，用于抗体耦联与固定。
  5. 预清除（Pre-clearing）: 先用不含抗体的树脂去除样品的非特异性结合。
  6. Clean-blot二抗: 只识别未变性一抗的检测试剂，避免重/轻链信号。
  7. 交联固定: 用交联剂或活化树脂将抗体共价固定于载体，防止洗脱。
  8. 洗涤缓冲优化: 调整PBS/TBS、去污剂、盐和还原剂以降低背景。
  9. 磁珠与离心柱: 快速分离固相与液相，减少样品损失和背景。