内容总结：

荧光定量PCR是非常经典而又发展迅速分子生物学技术。在分子诊断，肿瘤研究，个体化医疗等领域已广泛应用。本次讲座主要讨论各个领域应用案例以及荧光定量PCR平台最新的技术发展。

演讲者：赛默飞荧光定量PCR产品经理 魏刚刚

类型：技术讲座

难度：高级

目标受众：生命科学研究人员、临床检验人员、分子诊断工程师

[00:00-09:59] qPCR平台方法: 平台演进和试剂库及应用范围

[10:00-16:59] 位点突变检测方法: 末端延伸和封闭探针及灵敏度

[17:00-24:59] 微流体芯片操作: 加样导流和封板及注意事项

[25:00-31:59] 药物代谢检测流程: 面板使用及儿童与华法林

[32:00-39:59] 病原体芯片流程: OpenArray加样和多重检测及注意事项

[40:00-49:59] 数字PCR方法: 绝对定量和低频突变及比对

学习目标：

  1. 掌握位点突变检测的末端延伸与封闭探针方法
  2. 理解微流体芯片导流加样与封板的操作流程
  3. 学习OpenArray病原体高通量检测的加样与读数步骤
  4. 掌握药物基因组学面板在个体化用药中的应用
  5. 理解数字PCR的绝对定量原理与低频突变检测
  6. 了解PowerUp试剂与QuantStudio 3/5的关键特性

基础概念：

  1. 实时荧光定量PCR（qPCR）: 利用荧光信号实时监测扩增，实现相对或定量检测的平台。
  2. 末端特异性延伸: 引物3'端与目标位点完全匹配时才延伸的特异性设计，提升突变检测准确性。
  3. 封闭探针（阻断设计）: 对非目标等位基因信号进行封闭的探针策略，降低交叉信号干扰。
  4. 微流体芯片: 基于384孔预包埋试剂的芯片，导流加样、离心分配与封板，降低操作误差。
  5. OpenArray芯片: 3072纳升级反应孔的玻璃载体，实现多样品多靶标的高通量检测。
  6. 数字PCR: 将样本分隔至大量微反应中，通过阳性计数实现绝对定量，无需标准曲线。
  7. ABY与ZOOM染料: 优化第三、第四通道的荧光染料，提升多重检测的通道区分度。
  8. UDG去污染: 通过尿嘧啶DNA糖基化酶在预热阶段降解残留PCR产物，降低气溶胶污染。