内容总结：

演讲者：晏义平 博士——赛默飞细胞生物学部资深干细胞研究员
杨建平 博士—— 赛默飞合成生物学部资深研发科学家

讲座简介：

  1. 介绍多能干细胞研究的工作流程，全新的培养基StemFlex™ Medium及其在多能干细胞培养和研究中的作用
  2. 介绍基因编辑工作流程，最新的Cas9蛋白和gRNA升级产品和其在实验中的条件优化，提高您的CRISPR效率

类型: 技术讲座

难度: 中级

目标受众: 生命科学研究人员、干细胞与基因编辑实验人员

  • 培养基基础: KSR和E8方法及选择建议
  • StemFlex操作: 换液和传代流程及注意事项
  • 单细胞操作: 解离方法和矩阵选择及注意事项
  • CRISPR方法: 设计和转染流程及检测操作视频
  • RNP操作: Cas9蛋白和gRNA方法及效率

学习目标：

  1. 掌握iPSC培养基选择与换液传代流程
  2. 理解单细胞解离方法和矩阵选择
  3. 学习CRISPR gRNA设计与脱靶控制
  4. 掌握RNP转染与编辑效率提升方法
  5. 理解HDR敲入模板与同源臂优化策略

基础概念：

  1. StemFlex培养基: 赛默飞新型iPSC培养基，支持单细胞传代与低频换液。
  2. FGF2稳定性: 维持人多能干细胞特性的关键因子，在37℃易降解需配方稳定化。
  3. RNP（Cas9-gRNA复合体）: 预组装的Cas9蛋白与gRNA复合物，用于高效低脱靶编辑。
  4. TrueCut Cas9 v2: 优化结构的Cas9蛋白版本，提升编辑效率与降低脱靶。
  5. GCD检测试剂盒: 基于错配切割的凝胶定量方法，用于评估编辑效率。
  6. SSODN供体DNA: 单链DNA模板，常用于小片段HDR敲入并可化学修饰。
  7. 非对称同源臂: 在3'端设置短同源臂以匹配重切端，提高HDR效率。
  8. 慢病毒文库（array/pooled）: 以gRNA文库进行大规模筛选的传递形式，适配难转染细胞。