Applied Biosystems SeqStudio基因分析仪 支持—故障排除

SeqStudio 卡夹仅在推荐的储存条件（2–8°C）下经过测试。如果将卡夹存放在仪器上，请确保阴极缓冲液容器已就位，并且仪器电源保持开启。

SeqStudio 卡夹仅在推荐的储存条件（2–8°C）下经过测试。

SeqStudio 基因分析仪上的红色结果指示可能表示多种与数据质量相关的问题（例如信号超幅、无信号、迁移问题等）。关于每类问题的详细信息及故障排除方法，详见《SeqStudio 遗传分析仪 仪器与软件 v.1.1 用户指南》的附录 A。

当 SeqStudio 基因分析仪的硬盘开始接近满载时，系统会自动删除仪器上最旧的运行数据，为新数据腾出空间。

如果您拥有 Thermo Fisher Cloud 帐户，并将 SeqStudio 基因分析仪连接到该帐户，则可以通过 SeqStudio 应用远程监控运行。设置步骤如下：

• 使用您的 Cloud 仪器配置文件和 PIN 登录仪器
• 在主屏上，点击 Settings > Instrument settings > Email Notifications
• 在 Email Notifications 页面，选择或取消选择您希望接收电子邮件通知的信息，然后点击 Done。

注意：如果您登录的是本地账户而非 Thermo Fisher Connect（或 Thermo Fisher Cloud）账户，这些选项将不可用。

可能的原因及相应解决方法如下：

• 尺码标准质量差：峰高一致性低或配合拟合质量差。重新进样（re-inject）有时可解决此问题。
• Sizecaller 在尺标中发现峰变宽：系统或样品中存在某些因素导致峰迁移变慢并变宽。重新进样有时可解决该问题。也可能由使用过期的 卡夹（墨盒）或阴极缓冲液容器（Cathode Buffer Container）引起。
• 尺码判定质量值处于中间范围：尺码标准的数据质量可能较低。重新进样有时可解决该问题；如果失败，请检查原始数据中是否存在超幅（offscale）信号或峰高较低的峰。
• 检测到的尺码标准峰数少于尺码标准定义中的峰数：样品中较小的一些峰可能被引物峰掩盖；或者如果运行时间缩短，较大的峰可能未出现。
• 分析范围过小：在分析设置中扩展范围。

当软件因数据质量差而无法进行碱基调用（basecall）时，会触发 Basecalling Quality 警告。重新进样有时可以解决该问题。如果仍无法解决，请制备新样品。如果问题持续存在，请通过 techsupport@thermofisher.com 联系技术支持。

如果在 SeqStudio 基因分析仪上出现低 QC 标志，说明样品中存在微弱信号或无信号。可能原因包括：

• 样品体积不足
• 样品浓度过低
• 样品孔中存在气泡
• 测序反应失败
• 试剂过期或老化
• 样品降解
• 样品纯化效果差

重新运行样品有时能改善结果。在此之前，请执行以下检查：

• 检查样品板，确保板底无气泡；对于片段分析样品以及未用 BigDye XTerminator 进行清理的测序样品，体积至少为 10 µL。对于使用 BigDye XTerminator 清理的测序样品，在加入 SAM 溶液和 XTerminator 试剂后，最小体积应为 65 µL。
• 如果 SeqStudio 基因分析仪的卡夹或阴极缓冲液容器已过期，请在重新运行样品前更换。
• 如果使用 BigDye XTerminator 进行清理且出现染料团，请将样品再旋涡震荡额外 10 分钟，速度为 1,800–2,000 rpm。

在完成上述检查后，如果样品仍未出现信号，请尝试运行 Sequencing Standard（测序标准）对照。如果对照信号存在，则问题很可能出在模板 DNA 的制备或测序反应上。如果对照无信号，请尝试更换卡夹并重新运行。如果仍然失败，请联系仪器服务，因为需要提交维修工单。

SeqStudio 基因分析仪上的高信号强度 QC 标志表示某些峰达到饱和（>30,000 rfu）。重新进样有时可以解决该问题。如果重新进样无效，其他可能的解决方法包括：

• 进行级联稀释（serial dilute）样品，直到不再超幅。
• 调整进样时间和电压。

在 SeqStudio 基因分析仪上出现分辨率差或分辨率丢失的样品，可能是样品随时间降解所致。样品在 Hi-Di 甲酰胺中于仪器上可稳定保存最长 24 小时。如果使用长运行模块（long run module），请将运行样本数限制为 48 个以避免降解。如果样品降解速度比上述更快，请确保 Hi-Di 甲酰胺未超过一年且冷冻/解冻次数不超过 8 次。如果使用除 BigDye XTerminator 或 Hi-Di 甲酰胺以外的注射溶液，尝试将注射溶液换成其中之一。如果卡夹已过有效期，请在仪器上更换新的卡夹。样品清理不当也可能导致数据质量差或分辨率丢失。

样品在 SeqStudio 基因分析仪数据中出现 pull up 或 pull down 可能是由以下原因引起：

• 染料校准未更新或与样品不匹配。
• 样品超幅（>30,000 rfu）。
• 在板设置中选择了错误的染料组合。

自动的光谱校准算法需要高质量数据才能生成优化矩阵。对于片段分析，建议在首次运行样品之前用基质标准制作光谱。此操作只需在首次初始运行之前执行一次。如果刚刚执行并通过了光谱制作，打开板设置并核实已为运行选择了正确的染料组合。

来自 SeqStudio 基因分析仪的测序数据需在 Sequencing Analysis v.6.2 或更高版本中进行分析。如果您当前使用的是 Sequencing Analysis v.6.0，可通过此处下载最新版。

来自 SeqStudio 基因分析仪的测序数据需在 SeqScape Software v.3.1 或更高版本中进行分析。如果您当前使用的是 SeqScape Software v.3.0，可通过此处下载补丁。

来自 SeqStudio 基因分析仪的测序数据需在 Variant Reporter v.2.1 或更高版本中进行分析。如果您当前使用的是 Variant Reporter v.2.0，可通过此处下载补丁。

来自 SeqStudio 基因分析仪的片段分析数据需在 GeneMapper Software v.5.1 或更高版本中进行分析。如果您当前拥有 GeneMapper Software v.5.0，可通过此处下载补丁。