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报告基因载体
我使用了你们提供的一款pTracer™载体，但未观察到任何荧光。可能是什么原因？

这里列举了一些可能的原因与解决方案：

  • 培养基中的核黄素导致的高荧光背景——使用1XPBS替换培养基，以减少背景荧光。
  • 所使用的滤光片组无法使用最佳波长进行激发或无法兼容发射荧光的检测——请使用Omega Optical提供的XF76滤光片。
  • 转染效率过低以至于无法检测被转染细胞——优化您的转染条件或尝试使用其他方法。
  • 由于所使用的细胞系无法高表达Cycle 3 GFP蛋白——在HEK-293细胞中，最强的荧光信号通常在转染后72小时出现。
特殊载体
我使用你们的pDisplay™载体在细胞表面表达我们的蛋白。使用anti-HA抗体进行Western杂交成功检测到该蛋白的表达，但使用anti-myc抗体的免疫荧光检测未能发现其在膜表面的表达。你们能提供一些帮助么？

我们建议您对载体序列进行检测，以确保目的基因和血小板衍生生长因子受体（PDGFR）跨膜域在同一个读码框中。

我使用了pSecTag2载体，仅观察到目的基因在胞浆中表达，未见分泌型表达。你们能提供一些帮助么？

如果目的基因的起始密码子位于一个完整的Kozak序列中，就有可能优先于载体的起始密码子被翻译出来，导致该蛋白缺乏引导序列或未被糖基化，因此无法准确定位于内质网及被分泌出来。这一情况比较罕见，但的确发生过。如果是这一原因，我们推荐您使用PCR的方法来删除起始密码子。

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