Dynabeads™ CD14
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Invitrogen™

Dynabeads™ CD14

Dynabeads CD14 是共价偶联抗人 CD14 抗体的超顺磁性微珠,可直接从诸如全血、骨髓、血沉棕黄层、外周血单核细胞 (PBMC) 以及组织消化产物等各种样品轻松地分离或去除人 CD14+ 细胞。
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Dynabeads CD14 是共价偶联抗人 CD14 抗体的超顺磁性微珠,可直接从诸如全血、骨髓、血沉棕黄层、外周血单核细胞 (PBMC) 以及组织消化产物等各种样品轻松地分离或去除人 CD14+ 细胞。 Dynabeads CD14 的优点:

  • 从各种样品中快速高效地分离 CD14+ 细胞—无需分选柱
  • 用于下游分子检测的阳性分离 CD14+ 细胞的纯度、产量和活力都很高
  • 从各种样品中快速高效地去除 CD14+ 细胞

关于 Dynabeads CD14

Dynabeads CD14 是一种均匀的具有超顺磁性的微珠(4.5 μm 直径),表面包被特异于CD14膜抗原的原代单克隆抗体,对主要在人类单核细胞上表达的 CD14 膜抗原具有特异性。 由于磁珠的大小,Dynabeads CD14 只需大约 30 分钟即可从诸如全血和骨髓等粘性样品中轻松高效地分离或去除细胞。 Dynabeads CD14 还可以高效回收高纯度及较强活性的细胞,用于下游分子研究;例如,在下游分子研究中,需要裂解仍附着在磁珠上的细胞,并进一步纯化核酸或蛋白质。 请注意,这些磁珠不会释放完整的细胞,因此,如果您想要分离用于基于细胞的应用的 CD14+ 细胞,或者需要使用流式细胞仪分析样品,则请查看我们的人类总单核细胞产品系列

基于磁珠的分离技术,便于轻松操作

在连续混合下将 Dynabeads CD14 添加到样本中,以优化 Dynabeads 与靶细胞的结合。 将样品置于磁力架上,只需 1-2 分钟即可将与磁珠结合的靶分子从其余样品中分离出来。 如要去除,将上清液移至一新试管以用于进一步研究,并丢弃磁珠结合细胞。 如要进行阳性分离以用于分子研究时,移除上清液并在缓冲液中洗涤磁珠结合细胞 2-3 次,以获得理想纯度。 细胞可在仍附着在磁珠上时被裂解,并将上清液转移至一新试管以用于下游分子分析。 起始样本可以是全血、血沉棕黄层、骨髓、PBMC 或组织消化物。

可供自动化使用的 KingFisher 纯化系统

该产品是使用 KingFisher 系统的高通量工作流程的理想选择。 适用于 KingFisher Flex 和 Apex 工作流程的用户指南和程序可供下载。

了解有关 Dynabeads 产品的更多信息

仅供科研使用。不可用于诊断程序。

规格
细胞类型单核细胞
包括5 mL Dynabeads CD14 coated with anti-CD14 monoclonal antibody.
分离技术用于分子应用的去除、阳性分离
池数量处理总计 ∼2 x 10^9 个细胞
输出可行性>95%
产品线DYNAL,Dynabeads
纯度或质量等级研究级
数量5 mL
样品类型PBMC、血液
运输条件室温
原始材料细胞数量一次试验可分离 1x10^7 PBMC
目标种属
直径(公制)4.5 μm
产品类型抗体包被微球
Unit SizeEach
内容与储存
本产品含:5 mL Dynabeads™ CD14,包被抗 CD14 单克隆抗体。

储存条件:2°C 至 8°C。切勿冷冻。

常见问题解答 (FAQ)

我的Dynabeads磁珠不能很好地吸附到磁力架上,对此你们有什么建议吗?

请查看以下可能原因:

•溶液太粘稠。
•蛋白质间相互作用导致磁珠聚集。

尝试以下建议:
•延长分离时间(将管子留在磁力架上2-5分钟)。
•向裂解液中加入DNase I(约0.01 mg/mL)。
•将结合和/或清洗缓冲液中的Tween20浓度增加至约0.05%。
•向结合和/或清洗缓冲液中加入最多至20 mM 的β-巯基乙醇。

我想要分离较长的双链DNA片段,你们有什么产品可以推荐?

对于小于1 kb的生物素标记DNA,我们推荐使用Dynabeads M270链霉亲和素磁珠和MyOne C1磁珠。对于大于1kb的双链DNA分子,我们推荐Dynabeads KilobaseBINDER试剂盒。KilobaseBINDER试剂包括M-280链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠和一种含有专利的固定活化剂的结合液,可结合较长的生物素化DNA分子以进行分离。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/immobilisation-of-long-biotinylated-dna-fragments.html),查看关于长的生物素化DNA片段分离的更多信息。

我能否使用Dynabeads磁珠分离单链DNA模板?

可以,Dynabeads磁珠可用于分离单链DNA。链霉亲和素Dynabeads磁珠能够以生物素化的DNA片段为靶标,通过使双链DNA变性,从而去除非生物素化链。链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠不会抑制任何酶活性。因此,可以在固相上直接对磁珠结合的DNA进行下一步处理。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/preparing-single-stranded-dna-templates.html),查看关于单链DNA捕获的更多信息。

什么是磁化率?

磁化率能够衡量磁珠向磁力架迁移的速度,其大小取决于铁含量和氧化铁的特性。Dynabeads磁珠的磁化率是指质量磁化率,单位可以是cgs单位/g或m^3/kg(国际单位制)。对于亚铁磁性和铁磁性物质,质量磁化率取决于磁场强度(H),这些物质的磁化强度与H不是线性关系,而是随着场强增加而趋于饱和。因此, Dynabeads磁珠的质量磁化率是在固定条件下由标准操作程序而测定的。我们产品目录中给出的质量磁化率是国际单位制。磁化率由从高斯(cgs、emu)单位向国际单位的转换,是通过“高斯系数(emu/g或cgs/g)x 4π x 10^-3”而实现的。所得单位也被称为合理化质量磁化率,与(国际单位制)无量纲磁化率单位有所区别。通常,质量磁化率可用来衡量在非均匀磁场中影响物体的力(Fz)。测定Dynabeads磁珠的质量磁化率时,首先对样本称重,然后将样本放置于已知强度的磁场中。随后,再次称重得到样本重量(F1),并与关闭磁场时样本的重量(F0)进行对比。使用下述公式计算磁化率:K x 10^–3 = [(F1-F0) x m x 0.335 x 10^6],K表示质量为m的样本的质量磁化率。最后,将磁化率转换为国际单位制。

我如何确定Dynabeads磁珠的偶联效率?

有多种不同的方法可以检测配体与磁珠结合,包括光密度(OD)检测、荧光标记和放射性标记。

对于OD检测,应在配体固定到磁珠上之前检测配体的OD值,并将其与包被后上清液中剩余的配体浓度进行比较。这样可以粗略检测有多少蛋白与磁珠结合。 实验方案: 1.将分光光度计设置到正确的波长。使用偶联缓冲液作为空白组。 2.检测偶联前溶液的吸光值。根据配体的加入量,可能需要进一步稀释以读取吸光值。 3.检测偶联后溶液的吸光值。也可能需要进一步稀释以读取吸光值。 4.计算偶联效率,以“蛋白质摄取量%”表示,如下所示:[(偶联前溶液的吸光值x D) – (偶联后溶液的吸光值x D)] x 100/(偶联前溶液的吸光值 x D),D = 稀释倍数。 对于荧光标记,我们建议对配体结合量进行反向定量,即检测偶联上清液中剩余的配体量(与原始样本对比),而不是直接检测磁珠上的配体量。将标记的配体加入到磁珠中,并检测上清液中剩余多少配体(而不是结合到磁珠上的配体)。通过与开始时加入的总配体量相比,可以计算出结合到磁珠上的配体量。由于Dynabeads磁珠具有自发荧光,因此,我们不推荐直接检测与磁珠结合的配体的荧光,而是推荐这种间接方法。标记物可以是FITC/PE等。有些研究人员也成功使用了直接检测方法(采用流式细胞仪)。 在3种方法中,放射标记的灵敏度最高,但难度最大。该方法涉及到对配体的一部分进行放射性标记。在偶联前,使用示踪剂量的放射性标记的I-125,将其以一定比例与“冷”配体混合。使用闪烁(γ)计数器对磁珠进行检测,并将磁珠的cpm值与标准品对比,得到磁珠上配体的绝对量。 实验方案: 1.取出适量磁珠,并使用1 mL结合缓冲液清洗。 2.吸取适量人IgG,置于一个单独的管子中。 3.将人IgG与I-125标记的人IgG(30,000–100,000 cpm)混合。 4.使用结合缓冲液将人IgG与I-125标记的人IgG混合物稀释至100mL。 5.室温下孵育30分钟,使用闪烁计数器检测cpm值。 6.清洗磁珠(和包被层)4次,再次检测cpm值。 使用下述方程计算结合率%:(清洗后cpm值/清洗前cpm值)x100%。

引用和文献 (3)

引用和文献
Abstract
Non-enzymatic glycation of bone collagen modifies osteoclastic activity and differentiation.
Authors:Valcourt U, Merle B, Gineyts E, Viguet-Carrin S, Delmas PD, Garnero P,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:17142454
Type I collagen, the major organic component of bone matrix, undergoes a series of post-translational modifications that occur with aging, such as the non-enzymatic glycation. This spontaneous reaction leads to the formation of advanced glycation end products (AGEs), which accumulate in bone tissue and affect its structural and mechanical properties. ... More
Collaborative action of NF-kappaB and p38 MAPK is involved in CpG DNA-induced IFN-alpha and chemokine production in human plasmacytoid dendritic cells.
Authors:Osawa Y, Iho S, Takauji R, Takatsuka H, Yamamoto S, Takahashi T, Horiguchi S, Urasaki Y, Matsuki T, Fujieda S,
Journal:J Immunol
PubMed ID:16982926
CpG DNA induces plasmacytoid dendritic cells (pDC) to produce type I IFN and chemokines. However, it has not been fully elucidated how the TLR9 signaling pathway is linked to these gene expressions. We examined the mechanisms involving the TLR9 and type I IFN signaling pathways, in relation to CpG DNA-induced ... More
T regulatory-1 cells induce IgG4 production by B cells: role of IL-10.
Authors:Satoguina JS, Weyand E, Larbi J, Hoerauf A,
Journal:J Immunol
PubMed ID:15814696
The study was aimed to find out whether T cells with a regulatory profile could regulate the secretion of IgG4. Using tetanus Ag we found that PBMC of healthy human donors responded to exogenous IL-10 by down-regulating IgG1 and increasing IgG4 secretion. IgE was not affected. To investigate the direct ... More