SuperScript™ IV 单细胞/低上样量 cDNA 预扩增试剂盒
Invitrogen17万+抗体限时买二赠一,靶点广,灵活用!
SuperScript™ IV 单细胞/低上样量 cDNA 预扩增试剂盒
Invitrogen™

SuperScript™ IV 单细胞/低上样量 cDNA 预扩增试剂盒

Invitrogen SuperScript IV 单细胞/低上样量 cDNA 预扩增试剂盒可从完整的单细胞(1–1,000个)或少量总 RNA(2了解更多信息
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Invitrogen SuperScript IV 单细胞/低上样量 cDNA 预扩增试剂盒可从完整的单细胞(1–1,000个)或少量总 RNA(2 pg–10 ng)直接高效合成并扩增 cDNA。其采用方便操作的预混规格,含有细胞裂解、反转录 (RT) 和 PCR 扩增所需的所有组分。优质的酶(SuperScript IV 反转录酶和 Platinum SuperFi U DNA 聚合酶)组合确保高得率、灵敏度和准确度。由于反应时间短且实操时间极短,只需两小时即可完成这种简单的单管预扩增方案。制得的高质量完整 cDNA 可用于新一代测序 (NGS) 应用或实时荧光定量 PCR 基因表达分析。

SuperScript IV 单细胞/低上样量 cDNA 预扩增试剂盒的特点包括:
极佳灵敏度 — 可从低至单个细胞或 2 pg 的总 RNA 中轻松检测低丰度靶标
高质量 cDNA — 均匀覆盖,可获得全长转录信息
简化的工作流程 — 简单的单管实验方案
节省时间 — 裂解和反转录时间短
通用 — 完整预扩增兼容 NGS 或实时荧光定量 PCR 分析的下游分析

试剂盒利用了 SuperScript IV 反转录酶的末端脱氧核苷转移酶 (TdT) 活性。捕获含 oligo(dT) 和接头序列的寡核苷酸,以用作引物从含多聚腺苷酸的 RNA 选择性合成第一链 cDNA。反转录酶到达 RNA 模板的 5‘ 端时,TdT 活性在 cDNA 端增加 1–3 个额外核苷酸,从而在制得的 cDNA 的 3‘ 端完成模板转换并无连接掺入接头序列。SuperScript IV 反转录酶兼具高灵敏度和模板转换效率,可捕获超低丰度的靶标。

在后续 PCR 扩增步骤中,在 cDNA 两端掺入的接头序列可作为引物结合位点,从而完整预扩增全长模板。随附的 Platinum SuperFi U 预扩增预混液含有一种超高保真 DNA 聚合酶,可确保高效扩增长链模板(长达 10 kb)且无 PCR 引起的偏倚或错配。

仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
最终产品类型PCR 扩增 cDNA
产品规格试剂盒
反应次数96 次反应
最佳反应温度50°C
聚合酶Platinum SuperFi U DNA 聚合酶
数量96 reactions
试剂类型反转录
逆转录酶SuperScript IV
运输条件干冰
尺寸(最终产品)长达 10 kb
原始材料细胞或 RNA
技术Reverse Transcription, Preamplification
适用于(应用)二代测序(NGS), 实时 PCR (qPCR)
高 GC PCR 扩增效果
反应速度30 min。
Unit SizeEach
内容与储存

两包,各含:
• 10X 裂解缓冲液 (48 μL)
• RNase 抑制剂 (19 μL)
• 捕获寡核苷酸 (48 μL)
• 4X SuperScript IV cDNA 合成预混液 (240 μL)
• 模板转换寡核苷酸 (48 μL)
• 2X Platinum SuperFi U 预扩增预混液 (2 x 1.2 mL)
• 预扩增引物 (48 μL)
• 无核酸酶水 (2 x 1.25 mL)

储存在 –25°C 至 –15°C 下。

常见问题解答 (FAQ)

What products do you recommend for downstream analysis by qPCR when using the SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit?

We recommend using TaqMan Fast Advanced Master Mix for all TaqMan‑based detection methods.

We recommend using PowerTrack SYBR Green Master Mix for all SYBR Green‑based detection methods.

How many preamplification cycles are required when using the SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit?

Cycle number depends on sample type and input amount.
For example:
- 21 cycles for 2 pg of total RNA
- 18 cycles for 10 pg of total RNA, or single cells
- 15 cycles for 100 pg of total RNA, or up to 10 cells
- 11 cycles for 1-10 ng of total RNA, or 100–1,000 cells
- RNA quantity in cells can vary by cell type, cell cycle, and cell health. Optimization of the PCR cycle number may be needed to reach desired yields. An additional 2–3 cycles are required for smaller cells, such as Jurkat, Daudi, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC).

What enzyme is included in Platinum SuperFi U Preamplification Master Mix that is a component of the SuperScript IV Sincle Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit?

The master mix includes Platinum SuperFi U DNA Polymerase. It provides the same benefits as Platinum SuperFi II DNA Polymerase, but is also compatible with uracil.

Is purification of total RNA required when using the SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit?

Lysis buffer is included in the kit, therefore intact mammalian cells can be used. Purification of total RNA is required for cDNA preamplification of RNA isolated from plant, fungi, or other cell wall‑containing organisms.

Is rRNA depletion or mRNA enrichment required when using the SuperScript IV Single Cell/Low Input cDNA PreAmp Kit?

rRNA depletion or mRNA enrichment is not required, because only poly(A)‑containing RNA is amplified.