Dynabeads™ M-280 Tosylactivated
Invitrogen17万+抗体限时买二赠一,靶点广,灵活用!
Dynabeads™ M-280 Tosylactivated
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Dynabeads™ M-280 Tosylactivated

如果您想要将抗体、肽、完整蛋白质和功能性酶共价偶联至磁珠表面,请选择 Dynabeads™ Tosylactivated。优化的抗体方向使这些微珠成为蛋白质和蛋白质复合物免疫沉淀的理想选择。蛋白质复合物免疫沉淀的理想选择:背景值低,抗体与微珠表面共价连接,使 Dynabeads Tosylactivated 成为蛋白质和蛋白质复合物免疫沉淀了解更多信息
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142032 mL
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如果您想要将抗体、肽、完整蛋白质和功能性酶共价偶联至磁珠表面,请选择 Dynabeads™ Tosylactivated。优化的抗体方向使这些微珠成为蛋白质和蛋白质复合物免疫沉淀的理想选择。

蛋白质复合物免疫沉淀的理想选择:
背景值低,抗体与微珠表面共价连接,使 Dynabeads Tosylactivated 成为蛋白质和蛋白质复合物免疫沉淀(共免疫沉淀,共-IP)的极佳选择。温和而快速的微珠磁性聚集和耗时极短的孵育(可能是由于快速的表面结合动力学)使 Dynabeads Tosylactivated 成为极不稳定或和/或瞬时(短暂)蛋白复合物免疫沉淀的极佳之选。

超快速方案:

• 鉴定蛋白质复合物成员的时间以分钟计而非小时
• 分离时间短,足以鉴定瞬时和不稳定复合物
• 鉴定长时间方案无法鉴定的结合伴侣
• 快速方案使已经极低的背景结合进一步降低
• 信噪比更大

应用:
• 蛋白质和蛋白质复合物的 IP
• 将功能性酶偶联至微珠表面进行下游分析
• 将肽偶联至微珠表面以鉴定结合物

纯化具有以下特点的肽、蛋白质和酶:
• 瞬时稳定
• 结构完整
• 温度稳定性差
• 具有天然构型且功能完好

偶联过程概要:
通过过夜孵育所选配体和 Dynabeads Tosylactivated 实现共价偶联。与 Dynabeads Tosylactivated 偶联的配体通常包括肽和蛋白质(例如用于免疫沉淀或共免疫沉淀的抗体)。在中性至高 pH 值和 37°C 时发生偶联。我们建议在 pH 值 8.5-9.5 的条件下进行偶联,但是对于 pH 值稳定性差的配体,偶联可以在 pH 值为 7.4 的其他缓冲液中进行。

配体偶联步骤完成后,Dynabeads Tosylactivated 的实际表面包被不再具有活性,因此非特异性结合非常低。

关于 Dynabeads:
Dynabeads 是无孔单分散超顺磁珠。它们在溶液中有很强的运动能力,使偶联至微珠的配体可与全部样品持续进行相互作用。通过将试管转移到含有强磁场的支架(从红色导航栏导航 Brands > Dynal; ™> 磁力架),超顺磁珠被吸附至管壁。强磁场将微珠快速吸附至管壁,因此可以通过吸取轻松去除全部上清液。洗涤步骤与此类似。

Dynabeads Tosylactivated 的微珠表面特性:
•对甲苯磺酰基 (Tosyl) 基团
•疏水、pH 中性
•通过伯胺 (NH2) 或巯基 (SH) 基团共价结合

每毫克微珠的结合容量:
随配体而变化(例如:5-10 µg IgG)
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
最小洗脱体积5 μL
产品规格悬浮磁珠
高通量能力兼容高通量应用
纯度或质量等级研究级
数量2 mL
样品类型任意样品类型
有效期自生产之日起 36 个月
运输条件室温
表面功能基团对-甲苯-磺酰基,Tosylactivated
产品线DYNAL™,Dynabeads™
类型Tosylactivated 微珠
Unit SizeEach
内容与储存
将这些磁珠储存在 2-8°C 下。

常见问题解答 (FAQ)

我的Dynabeads磁珠不能很好地吸附到磁力架上,对此你们有什么建议吗?

请查看以下可能原因:

•溶液太粘稠。
•蛋白质间相互作用导致磁珠聚集。

尝试以下建议:
•延长分离时间(将管子留在磁力架上2-5分钟)。
•向裂解液中加入DNase I(约0.01 mg/mL)。
•将结合和/或清洗缓冲液中的Tween20浓度增加至约0.05%。
•向结合和/或清洗缓冲液中加入最多至20 mM 的β-巯基乙醇。

我想要分离较长的双链DNA片段,你们有什么产品可以推荐?

对于小于1 kb的生物素标记DNA,我们推荐使用Dynabeads M270链霉亲和素磁珠和MyOne C1磁珠。对于大于1kb的双链DNA分子,我们推荐Dynabeads KilobaseBINDER试剂盒。KilobaseBINDER试剂包括M-280链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠和一种含有专利的固定活化剂的结合液,可结合较长的生物素化DNA分子以进行分离。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/immobilisation-of-long-biotinylated-dna-fragments.html),查看关于长的生物素化DNA片段分离的更多信息。

我能否使用Dynabeads磁珠分离单链DNA模板?

可以,Dynabeads磁珠可用于分离单链DNA。链霉亲和素Dynabeads磁珠能够以生物素化的DNA片段为靶标,通过使双链DNA变性,从而去除非生物素化链。链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠不会抑制任何酶活性。因此,可以在固相上直接对磁珠结合的DNA进行下一步处理。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/preparing-single-stranded-dna-templates.html),查看关于单链DNA捕获的更多信息。

什么是磁化率?

磁化率能够衡量磁珠向磁力架迁移的速度,其大小取决于铁含量和氧化铁的特性。Dynabeads磁珠的磁化率是指质量磁化率,单位可以是cgs单位/g或m^3/kg(国际单位制)。对于亚铁磁性和铁磁性物质,质量磁化率取决于磁场强度(H),这些物质的磁化强度与H不是线性关系,而是随着场强增加而趋于饱和。因此, Dynabeads磁珠的质量磁化率是在固定条件下由标准操作程序而测定的。我们产品目录中给出的质量磁化率是国际单位制。磁化率由从高斯(cgs、emu)单位向国际单位的转换,是通过“高斯系数(emu/g或cgs/g)x 4π x 10^-3”而实现的。所得单位也被称为合理化质量磁化率,与(国际单位制)无量纲磁化率单位有所区别。通常,质量磁化率可用来衡量在非均匀磁场中影响物体的力(Fz)。测定Dynabeads磁珠的质量磁化率时,首先对样本称重,然后将样本放置于已知强度的磁场中。随后,再次称重得到样本重量(F1),并与关闭磁场时样本的重量(F0)进行对比。使用下述公式计算磁化率:K x 10^–3 = [(F1-F0) x m x 0.335 x 10^6],K表示质量为m的样本的质量磁化率。最后,将磁化率转换为国际单位制。

我如何确定Dynabeads磁珠的偶联效率?

有多种不同的方法可以检测配体与磁珠结合,包括光密度(OD)检测、荧光标记和放射性标记。

对于OD检测,应在配体固定到磁珠上之前检测配体的OD值,并将其与包被后上清液中剩余的配体浓度进行比较。这样可以粗略检测有多少蛋白与磁珠结合。 实验方案: 1.将分光光度计设置到正确的波长。使用偶联缓冲液作为空白组。 2.检测偶联前溶液的吸光值。根据配体的加入量,可能需要进一步稀释以读取吸光值。 3.检测偶联后溶液的吸光值。也可能需要进一步稀释以读取吸光值。 4.计算偶联效率,以“蛋白质摄取量%”表示,如下所示:[(偶联前溶液的吸光值x D) – (偶联后溶液的吸光值x D)] x 100/(偶联前溶液的吸光值 x D),D = 稀释倍数。 对于荧光标记,我们建议对配体结合量进行反向定量,即检测偶联上清液中剩余的配体量(与原始样本对比),而不是直接检测磁珠上的配体量。将标记的配体加入到磁珠中,并检测上清液中剩余多少配体(而不是结合到磁珠上的配体)。通过与开始时加入的总配体量相比,可以计算出结合到磁珠上的配体量。由于Dynabeads磁珠具有自发荧光,因此,我们不推荐直接检测与磁珠结合的配体的荧光,而是推荐这种间接方法。标记物可以是FITC/PE等。有些研究人员也成功使用了直接检测方法(采用流式细胞仪)。 在3种方法中,放射标记的灵敏度最高,但难度最大。该方法涉及到对配体的一部分进行放射性标记。在偶联前,使用示踪剂量的放射性标记的I-125,将其以一定比例与“冷”配体混合。使用闪烁(γ)计数器对磁珠进行检测,并将磁珠的cpm值与标准品对比,得到磁珠上配体的绝对量。 实验方案: 1.取出适量磁珠,并使用1 mL结合缓冲液清洗。 2.吸取适量人IgG,置于一个单独的管子中。 3.将人IgG与I-125标记的人IgG(30,000–100,000 cpm)混合。 4.使用结合缓冲液将人IgG与I-125标记的人IgG混合物稀释至100mL。 5.室温下孵育30分钟,使用闪烁计数器检测cpm值。 6.清洗磁珠(和包被层)4次,再次检测cpm值。 使用下述方程计算结合率%:(清洗后cpm值/清洗前cpm值)x100%。