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这里是一些可能导致条带弥散的原因: •DNA被降解。请避免DNA标准品被核酸酶污染。 •凝胶内上样了过多的DNA。减少凝胶内的DNA量。 •DNA被蛋白污染。电泳前使用苯酚抽提除去蛋白。 •对于小分子量DNA,条带可能会在染色时扩散。在电泳之前加入溴化乙锭(EB)。 •对于放射性标记的DNA,标记是使用切口平移进行的。使用T4 DNA聚合酶对DNA进行置换合成来标记,或者使用T4多核苷酸激酶进行5’末端标记。 •使用了不合适的电泳条件。电泳电压不能超过~20 V/cm,电泳时保持温度<30°C,检查电泳缓冲液是否具有足够的缓冲能力。 •DNA含盐太多。电泳前使用乙醇沉淀去除过多的盐。
如果marker被加热了,会出现这种情况。请确保DNA ladder在使用前没有被加热过。
TrackIt DNA梯度标准品的样品缓冲液中含有2种示踪染料,可作为观察凝胶电泳进程的视觉指示分子,并能指示何时达到最大分辨率。示踪染料不会遮盖梯度标准品中的DNA条带,因为染料会跑出梯度标准品中大部分DNA条带的范围。 TrackIt蓝绿色/橙黄色上样缓冲液的配方含有独特的示踪染料,二甲苯蓝FF和橙黄G。我们推荐将TrackIt蓝绿色/橙黄色上样缓冲液用于10bp至1kb间的DNA片段。 TrackIt蓝绿色/黄色上样缓冲液含有独特的示踪染料,二甲苯蓝FF和柠檬黄。我们推荐将TrackIt蓝绿色/黄色上样缓冲液用于100bp至10kb间的DNA片段。二甲苯蓝FF的分子量为638.6,橙黄G为452.4,柠檬黄为534.4。 备注:不推荐将TrackIt DNA 梯度标准品用于聚丙烯酰氨凝胶,并且不推荐用于定量分析。
Sequences of Invitrogen DNA and RNA ladders are proprietary.
Invitrogen DNA ladders contain linear dsDNA fragments.