T4 DNA 聚合酶
T4 DNA 聚合酶
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T4 DNA 聚合酶

T4 DNA 聚合酶是具有 3´-脱氧核糖核酸内切酶活性,但没有 5´a3´ 脱氧核糖核酸内切酶活性的 DNA 聚合酶。 提供了解更多信息
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T4 DNA 聚合酶是具有 3´-脱氧核糖核酸内切酶活性,但没有 5´a3´ 脱氧核糖核酸内切酶活性的 DNA 聚合酶。 提供 T4 DNA 聚合酶技术公告。

应用:
通过取代合成标记线性双链 DNA (1)。 寡核苷酸介导的位点特异性突变 (2)。 双链 DNA 的 3´ 末端标记 (3)。 将 5´ 或 3 突出端磨成平末端 (4)。

来源:
纯化自表达质粒所带 T4 DNA 聚合酶的大肠杆菌

性能和质量测试:
单链和双链脱氧核糖核酸内切酶和磷酸酶分析;脱氧核糖核酸内切酶和聚合酶活性经过测试。

单位定义:
一个单位的酶量可以在 37°C 的反应体系中,以 DNase I 切口 DNA 作为模板•引物,在 30 分钟内向酸沉淀材料中掺入 10 nmol 总脱氧核糖核苷酸。

单位反应条件:
反应物共 0.1 ml,包括 50 mM 甘氨酸-NaOH (pH 8.8)、16.6 mM (NH4)2SO4、6 mM MgCl2、6.5 μM EDTA、10 mM 2-巯基乙醇、0.165 mg/ml BSA、1.6 mg/ml DNase I 切口鲑鱼睾丸 DNA、0.33 mM dCTP、0.33 mM dATP、0.33 mM dGTP、0.33 mM dTTP、76 nM [3H]dTTP 和酶,温度为 37 °C,时间 30 分钟。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
描述DNA 聚合酶
外切核酸酶活性3' - 5'
热启动
聚合酶T4 DNA 聚合酶
数量250 U
运输条件湿冰
Unit SizeEach
内容与储存
T4 DNA 聚合酶与一小瓶 5X T4 DNA 聚合酶缓冲液 [165 mM Tris 乙酸酯(pH 值 7.9)、330 mM 醋酸钠、50 mM 乙酸镁、5 mM DTT] 一起提供。储存在 -20°C 下。

常见问题解答 (FAQ)

我想将一个含5’或3’突出端的分子转变成平末端分子,应使用什么酶?这些酶有何区别?

T4 DNA聚合酶和大肠杆菌DNA聚合酶的Klenow片段,均可将突出端分子转变成平末端分子。但T4 DNA聚合酶的3’—5’核酸外切酶活性比Klenow更强。

What enzymes can I use to convert a molecule with a 5' or 3' overhang to a blunt molecule? What is the main difference between them?

T4 DNA polymerase and Klenow fragment of E.coli DNA polymerase can both convert overhangs to blunt molecules. The 3' - 5' exonuclease activity of the T4 DNA polymerase is much more efficient than Klenow.

Is there anything to prevent AmpliTaq Gold DNA polymerase from extending from the 3’ end of a TaqMan probe in a 5’ nuclease assay?

Yes. There is a phosphate group on the 3' end of all TaqMan probes that prevents such extension.

How does AmpliTaq Gold DNA Polymerase differ from AmpliTaq DNA Polymerase?

AmpliTaq Gold DNA Polymerase is a modified form of AmpliTaq DNA Polymerase that contains a proprietary chemical (or so-called hot start molecule) bound to the enzyme's active site. In order to activate the AmpliTaq Gold DNA Polymerase fully, we recommend an initial activation step of 95 degrees C for 10 min when using GeneAmp 10X PCR Buffer I and/or GeneAmp 10X PCR Buffer II and Mg in one of our thermal cyclers. When using GeneAmp 10X PCR Gold Buffer, activation time can be reduced to 5 minutes. Once activation is complete, you can proceed with your standard PCR cycling program (denaturing, annealing, extension, etc).

Does AmpliTaq Gold DNA Polymerase contain exonuclease (proofreading) activity?

No, AmpliTaq Gold DNA polymerase does not contain proofreading activity, however fidelity in PCR amplifications utilizing this enzyme may be improved. High fidelity can be achieved by: 1. Decreasing the final concentration of each nucleotide to 40-50 uM. 2. Using the lowest MgCl2 concentration possible. 3. Using less enzyme. 4. Decreasing extension times. 5. Using the highest annealing temperature possible. 6. Using as few cycles as possible.