SuperScript™ IV 第一链合成系统
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SuperScript™ IV 第一链合成系统
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SuperScript™ IV 第一链合成系统

适用于 RT-PCR 的 SuperScript™ IV 第一链合成系统经过优化,以从纯化 poly(A)+ 或总 RNA 中合成第一链了解更多信息
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货号包括反应次数
18091200Kit only200 次反应
18091050Kit only50 次反应
18091150Kit with ezDNase50 次反应
18091300Kit with ezDNase200 次反应
货号 18091200
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适用于 RT-PCR 的 SuperScript™ IV 第一链合成系统经过优化,以从纯化 poly(A)+ 或总 RNA 中合成第一链 cDNA。试剂盒包括 SuperScript™ IV 反转录酶 (RT),这是一种专有 MMLV 突变体,可在 RT 反应中产生稳健可靠的 cDNA 合成。SuperScript™ IV 合成系统相比基于 SuperScript™ III 的系统在抑制剂耐受性、合成性和反应速度等方面得到了很大提高,同时保留了前代系统的所有优点,包括较高的热稳定性、高效全长 cDNA 合成以及较低的 RNase 活性。在多种样品中存在可导致其他当前可用 RT 效率低下的抑制剂的情况下,SuperScript™ IV 系统仍能提供可靠、一致和快速的 cDNA 合成。

SuperScript™ IV 第一链合成系统包含 RT 反应所需的所有组分,以及一种其它对照基因和相关引物,同时为您提供定制 RT 设置的灵活性,以满足您的应用需求。SuperScript™ IV 合成系统是实现 RT-PCR 应用高性能和灵活性的首选。我们推荐将其用于所有 RT-PCR 应用,尤其是当重现性和可靠性成为主要考虑事项,以及 RNA 样品中的抑制剂可能干扰 cDNA 合成,进而导致基因表达研究出现偏倚时,我们推荐使用这款产品。

SuperScript™ IV 第一链合成系统的特性包括:
•显著提高了对各种可能干扰 cDNA 合成的抑制剂的耐受性
• 能在各类样品中进行可靠、特异的 cDNA 合成
• 反转录酶反应更快,将孵育时间从 >50 min 缩短至 10 min
• 持续合成能力明显优于 SuperScript™ III RT

酶来源
从表达 M-MLV pol 基因的大肠杆菌中提纯制成,并经过改良提高了热稳定性和半衰期、合成性、抑制剂耐受性,降低了 RNase H 活性。

性能和质量检测
脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶及核糖核酸酶分析;cDNA 产物的得率和长度。

单位定义
一个单位的 SuperScript™ IV RT 是指在 37°C 下使用多聚腺苷酸 (A) 寡核苷酸 (dT)12-18 作为模板/引物,将 1 nmole 脱氧核糖核酸在10分钟内掺入酸可沉淀材料所需要的酶量。

单位反应条件
50 mM Tris-HCl(pH 值 8.3)、4 mM MgCl2、10 mM DTT、50 mM KCl、0.5 mM dTTP、0.4 MBq/mL [3H]-dTTP、0.4 mM 多聚腺苷酸 (A) 寡核苷酸 (dT)12-18 和酶,20 μL,37°C 下 10分钟。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
最终产品类型第一链 cDNA
产品规格试剂盒
包括Kit only
反应次数200 次反应
最佳反应温度50°C
数量200 次反应
反应形式单独组分
试剂类型反转录
逆转录酶SuperScript IV
运输条件干冰
尺寸(最终产品)长达 12.3 kb
原始材料RNA
技术反转录
适用于(应用)RT-PCR, 实时 PCR (qPCR)
高 GC PCR 扩增效果
反应速度10 min。
Unit SizeEach
内容与储存

• Oligo(dT)20,4 x 50 μL (50 μM)
• 随机六聚体,4 x 250 μL (50 ng/μL)
• 5X RT 缓冲液,4 x 1 mL
• DTT, 4 x 250 μL (0.1 M)
• dNTP 混合物,250 μL (10 mM)
• SuperScript IV RT,4 x 50 μL (200 U/μL)
• 核糖核酸酶抑制剂,4 x 100 μL (40 U/μL)
大肠杆菌 RNase H,4 x 50 μL (2 U/μL)
• DEPC 处理水,4 x 1.2 mL
• 总 HeLa RNA,4 x 20 μL (10 ng/μL)
• 正义链对照引物,4 x 25 μL (10 μM)
• 反义链对照引物,4 x 25 μL (10 μM)

在 –30°C 至 –5°C 条件下储存所有组分。

常见问题解答 (FAQ)

Is it normal to see a band in the SuperScript IV First-Strand Synthesis System (Cat. Nos. 18091050, 18091200) "No Reverse Transcriptase (RT) Control"?

Yes. The SuperScript IV First-Strand Synthesis System (Cat. No. 18091050, 18091200) "No Reverse Transcriptase (RT) Control" will often display a level of amplification because of residual genomic DNA in the RNA preps. In general, you do not need to worry if a faint band shows up on a gel, as long as the intensity of the positive control is much higher.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

In your SuperScript IV RT protocols, there is no ezDNase inactivation step. Will active ezDNase affect RNA or the RT reaction?

The Invitrogen ezDNase Enzyme is a novel DNase that is highly specific for double-stranded DNA. It has no activity on single-stranded DNA in RT reactions (primers or probes), or on RNA. The enzyme is also thermolabile—it is inactivated quickly at temperatures typical for the SuperScript IV RT reaction (e.g., 50°C). The additional inactivation step is therefore not required in RT-qPCR applications.

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Which SuperScript IV RT format do you recommend for real-time PCR applications?

For RT-qPCR applications we recommend using the Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix (Cat. No. 11756050). The cDNA synthesis reaction setup with this master mix requires fewer pipetting steps and therefore reduces variation in the data. SuperScript IV RT, as a component of the master mix, offers the highest efficiency of cDNA synthesis step compared to competitors’ products.

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Are there any significant changes in the SuperScript IV RT protocol compared to the SuperScript III RT protocol?

The only change is that the incubation time for the reverse transcription reaction has been reduced from 50 minutes to 10 minutes. All the other parameters and steps are the same.

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Can I get comparable cDNA yield and length using the SuperScript IV RT 10-minute protocol as when using the 50-minute protocol for SuperScript III RT?

When compared with SuperScript III RT (and other manufacturers’ RTs) in a synthesis reaction for a 9 kb cDNA, SuperScript IV RT performed successful synthesis in just 10 minutes and did so with comparable (or improved) yield (as shown by gel band density).

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