Thermo Scientific LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒为利用电泳迁移率变动实验 (EMSA) 研究 RNA 蛋白相互作用提供了一种无放射性解决方案。
LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒的特点:
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灵敏 — 化学发光检测与放射性检测相当
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节省时间 — 与放射性系统所需的 16 小时曝光相比,X 射线胶片在曝光 1 至 5 分钟后即可显影
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灵活 — 兼容通过不同方法生物素化的 RNA 探针
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易于使用 — 全套试剂盒包括用于结合反应和 RNA 探针检测的优化试剂
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无放射性 — 不存在放射性 RNA 探针所具有的废弃物问题
RNA EMSA 试剂盒使用生物素化 RNA 探针和化学发光底物系统,可快速且安全地检测 RNA-蛋白复合物,灵敏度与传统
32P-同位素方法相当。全套试剂盒包含构建和优化蛋白-RNA 结合条件所需的全部试剂、用于蛋白-RNA 相互作用的阳性对照及核酸相互作用化学发光检测的全部试剂。
关于 LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒是通过与常用 DNA 凝胶迁移实验相似的凝胶电泳迁移模式的变化检测蛋白-RNA 相互作用的
体外技术。在 RNA EMSA 中,将标记的 RNA 探针与蛋白样品一起孵育,以开始结合。形成复合物后,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品。因为 RNA-蛋白复合物的迁移速度比游离 RNA 探针慢,所以使用 RNA 凝胶迁移实验可以观察到迁移距离。通过与过量未标记 RNA 结合竞争以减少特异性相互作用信号,验证了 RNA-蛋白相互作用的特异性。一般来说,突变或不相关 RNA 探针预计不会因特异性相互作用而竞争,在 EMSA 中检测时特定条带迁移的强度不应降低。完整的 LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒包含设置和优化 RNA 凝胶迁移分析所需的所有试剂,包括 RNA-蛋白质复合物形成的阳性对照。
LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒使用生物素化 RNA 探针、辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素和化学发光检测,以提供与使用放射性 RNA 探针时相似的灵敏度,但检测速度更快。标记的 RNA 探针可以在市场上购买或通过使用生物素化核苷酸进行失控
体外转录反应生成或通过使用 Thermo Scientific Pierce RNA 3' 末端生物素化试剂盒将生物素标记酶促连接至 RNA 链的 3' 末端生成。LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒对于通过这三种方法中的任何一种进行生物素化的 RNA 探针都有效;然而,在失控
体外转录 RNA 探针合成期间,RNA 二级结构可能会受到生物素化核苷酸的内部掺入的影响。因此,对于某些相互作用,可能需要定制的合成 RNA 探针或 3' 末端生物素化探针才能实现适当的蛋白-RNA 相互作用。
关于 LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒的阳性对照品LightShift 化学发光 RNA EMSA 试剂盒中包括的阳性对照品是铁反应元件 (IRE) RNA 探针。IRE 结合反应与其他实验样品同时进行设置和检测。在缺铁条件下,铁反应蛋白 (IRP) 仍与细胞中存在的 IRE RNA 结合,有效抑制铁蛋白(铁存储蛋白)的翻译,然后抑制转铁蛋白受体。在富铁条件下,IRE 结合活性丧失,进行铁蛋白和转铁蛋白翻译。该系统普遍存在,并可产生稳健的条带迁移。用 200 倍摩尔过量未标记 IRE RNA 孵育阳性对照反应将使特异性 IRE 条带迁移信号减少约 70%,而相似倍数过量的无关 RNA 探针将不会使 IRE 条带迁移显著减少。这些对照品可用于各 RNA 凝胶迁移实验,以验证蛋白-RNA 复合物形成的正确设置、电泳、转移和检测。
相关产品用于 LightShift™ 化学发光 RNA EMSA 试剂盒的 tRNAFor Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.