固定化木瓜蛋白酶（琼脂糖树脂）

Thermo Scientific Pierce 固定化木瓜蛋白酶由半胱氨酸-肽链内切酶（木瓜蛋白酶）组成，该酶固定在微珠状琼脂糖树脂上，用于从抗体中生成和纯化 Fab 片段。

木瓜蛋白酶是一种从木瓜蛋白酶乳胶中分离的非特异性半胱氨酸肽链内切酶，可用于广泛的应用。当在存在半胱氨酸的情况下将 IgG 分子与木瓜蛋白酶共孵育时，铰链区中的一个或多个肽键分裂，产生三个小片段：两个 Fab 片段和一个 Fc 片段。Fc 片段可通过固定化蛋白 A 或离子交换色谱与 Fab 片段分离。

50 千道尔顿 Fc 片段通常用于确定 Fc 受体的特异性，而不受抗原结合干扰。Fab 片段在免疫组织化学研究中非常有用，因为片段组织穿透的能力强于比完整 IgG。此外，仅使用免疫球蛋白的 Fab 部分，避免了 Fc 受体的非特异性结合。

木瓜蛋白酶也可用于生成 F(ab')2 片段。为了制备 F(ab')2 片段，首先用 10 mM 半胱氨酸活化木瓜蛋白酶，然后通过凝胶过滤去除。如果木瓜蛋白酶酶切过程中不存在半胱氨酸，则可以生成 F(ab')2 片段。这些片段通常不一致，并且可能存在重现性问题。

固定化木瓜蛋白酶可以在几乎任何应用中代替游离木瓜蛋白酶，且具有优势，因为它几乎无需自溶、消除了蛋白酶样品的污染，还可以通过去除木瓜蛋白酶或控制样品流过固定化木瓜蛋白酶来控制酶切。固定化木瓜蛋白酶还能够更加稳定地抵抗热诱导的变性，从而延长活性维持时间。ImmunoPure Fab 制备试剂盒含有固定化木瓜蛋白酶、其他必要试剂和适用于人、兔和小鼠抗体酶切的优化方案。