以下是可能原因和解决方案:
- 紫外光源质量差或曝光不充分::尽可能使用CCD照相机进行检测;确保紫外灯以合适的波长进行激发(280–310 nm)。
- 目的蛋白表达较差(上样量不足):每条泳道中电泳的蛋白量不满足检测方法的要求。
- 洗涤不充分;凝胶中残留的SDS阻止染色剂的结合:用超纯水洗涤凝胶3 × 20分钟,然后重新染色。
- 目的蛋白分子量较小(< 20kDa),在洗涤时从凝胶中扩散出来:水洗前,使用50%甲醇:7%乙酸溶液固定凝胶15分钟。
- 染色剂向凝胶中的扩散效果较差:将染色时间延长至10分钟(第2步);可在同一块凝胶上重复该步骤。