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以下是可能原因和解决方案: - 染色后的凝胶过度显色: 缩短显色时间。 - 洗涤步骤缺漏或水质较差: 不要跳过和减少洗涤步骤,应使用超纯水洗涤。 - 所用设备被污染: 使用超纯水将设备冲洗干净。 - 制胶所用化学品不纯或预制胶已过期: 使用分析级化学品或使用未过期的预制胶。 - 终止液不能有效终止凝胶显色: 制备新的5%乙酸,并在凝胶孵育的最初几分钟里更换2次。
以下是可能原因和解决方案: - 显色时间不足:凝胶显色时间>5分钟,或加入新配制的显色工作液。 - 样品中的蛋白质含量极低或无蛋白: 检测原始样品中的蛋白浓度。 - 溶液配制不恰当或遗漏了某些步骤: 检查溶液配制方法,并遵循操作步骤。 - 显色步骤前,水洗过度: 为完全去除之前使用的溶液,应洗涤凝胶3次,每次10分钟;从步骤2开始,再次染色。使用显色剂孵育前,不要过度洗涤。
使用质谱分析用Thermo Scientific银染染料染色后,有多种方法可回收和处理蛋白质以用于质谱分析。对于胶内胰蛋白酶消化,无论是否进行还原和烷基化,均可使用Thermo Scientific胶内胰蛋白酶消化试剂盒(货号89871)。应考虑遵循质谱分析中核心设备的建议。
质谱分析用Thermo Scientific银染染料具有次纳克级别的灵敏度,可在固定后30分钟内检测到蛋白含量低至0.25 ng的条带。
质谱分析用Thermo Scientific银染染料可在室温下稳定保存1年。