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这最有可能是因为脱色时间不足。我们建议将膜放在30%乙腈/20%乙醇溶液中另外脱色5分钟。
这最有可能是因为蛋白转印出现问题。请确认转膜液和转印条件是正确的。
以下是可能原因和解决方案: - 样品中无蛋白质:使用一个已知含量的纯蛋白质作为对照 - 样品中的蛋白质含量不足:增加总蛋白上样量 - 未将SDS从凝胶上完全去除:开始染色前,更彻底地洗涤凝胶
这最有可能是因为SDS的干扰。我们建议增加染色前的凝胶洗涤次数和/或洗涤液体积。也可使用25%异丙醇/10%乙酸溶液或12%三氯乙酸将凝胶脱色5分钟。
由于小分子量蛋白质(< 10 kDa)在染色期间容易从凝胶中浸出,因此,在使用PageBlue蛋白质染色溶液对凝胶染色前,需要使用戊二醛固定。其他常见的蛋白质固定剂(如乙酸、异丙醇、乙醇、三氯乙酸等)在此不适用,因为会将蛋白质在染色期间从凝胶中洗脱。请参见使用手册第3页的固定步骤。