PageRuler™ Unstained Protein Ladder

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Thermo Scientific™

PageRuler™ Unstained Protein Ladder

Unstained mixture of 14 recombinant, highly purified proteins (10kDa to 200kDa) for use as size standards in protein electrophoresis (SDS-PAGE) and western blotting.

货号	数量
26614	2 x 250μL

货号 26614

价格（CNY)

295.00

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2 x 250μL

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Thermo Scientific PageRuler Unstained Protein Ladder is a mixture of 14 recombinant, highly purified, unstained proteins (10 to 200 kDa) for use as size standards in protein electrophoresis (SDS-PAGE) and western blotting. The protein ladder is supplied in a ready-to-use format for direct loading onto gels; no need to heat, reduce, or add sample buffer prior to use.

Features of the PageRuler Unstained Protein Ladder include:

Reference bands—50 kDa band is stronger than the others for easy orientation
Tagged—the ladder proteins contains an integral Strep-tag™ II sequence and can be detected on western blots using Strep-Tactin™ conjugates or an antibody against Strep-tag™ II Sequence

Applications

Accurate protein sizing on SDS-polyacrylamide gels and western blots

仅供科研使用。不可用于诊断程序。

凝胶兼容性Bolt™ Bis-Tris Plus 凝胶、Novex™ Tricine 凝胶、Novex™ Tris-甘氨酸凝胶、NuPAGE™ Bis-Tris 凝胶、NuPAGE™ Tris-醋酸盐凝胶、SDS-PAGE 凝胶

分子量200、150、120、100、85、70、60、50、40、30、25、20、15、10 kDa

产品线PageRuler™

产品类型蛋白分子量标准品

数量2 x 250μL

运输条件经批准可置于湿冰或干冰上运输

染色剂类型非预染蛋白Marker

系统类型Western 印迹，SDS-PAGE

标记物数量14

大小范围10-200 kDa

Unit SizeEach

内容与储存

内容物:两样品瓶,每瓶 250 μL,每瓶蛋白浓度为 0.02 至 0.05 mg/mL

储存缓冲液:62.5 mM Tris-H₃PO₄(25°C 下 pH 值 7.5)、1 mM EDTA、2% SDS、10 mM DTT、1 mM NaN₃、0.01% 溴酚蓝和 33% 甘油

储存:接收后,在 -20°C 下储存

常见问题解答 (FAQ)

我使用了你们的一种Thermo Scientific PageRuler 非预染蛋白质分子量标准品，这些条带没有很好地分离。可能是什么原因造成的？

以下是一些可能的原因和解决方案：

- 样品被煮沸：丢弃煮沸的样品。
- 使用的分子量标准品体积过大：加入较少的体积或使用前用蛋白质上样缓冲液稀释分子量标准品。
- 储存缓冲液中的DTT氧化：加入新制备的DTT溶液使最终浓度达到100mM。

我使用了你们的一种蛋白质标准品进行转印，发现一些小分子蛋白质条带穿过了膜。我该如何解决这个问题？

•降低电压、电流或缩短转印时间
•确保转膜缓冲液的甲醇浓度合适；可使用浓度为10–20%的甲醇，从而去除SDS-蛋白质复合物中的SDS，并促进蛋白质与膜的结合。
•确保转膜缓冲液的SDS浓度合适（若加入了SDS），SDS浓度不要超过0.02–0.04%。过多的SDS会阻碍蛋白质与膜的结合。过多的SDS会阻碍蛋白质与膜的结合。
•检查膜的孔径和靶标蛋白质的大小。小于10kDa的蛋白质很容易穿过0.45μm孔径的膜。如果您的目标蛋白质小于10 kDa，那么最好使用0.2μm孔径的膜。

我使用了你们的一种蛋白质标准品进行转印，发现一些高分子蛋白质条带转印到膜上的效果很差。可以提供一些提示吗？

•增加电压、电流或转印时间
•凝胶和SDS-蛋白质复合物中的SDS会促进蛋白质从凝胶中洗脱，但抑制蛋白质与膜的结合。这种抑制作用在硝化纤维素膜上的强度大于PVDF膜。对于难以从凝胶中洗脱的蛋白质，如大分子量蛋白质，可在转膜缓冲液中加入少量SDS以改善转印效果。我们建议在组装三明治前将凝胶置于含0.02–0.04% SDS的2x转膜缓冲液（无甲醇）中预平衡10分钟，然后使用含10%甲醇和0.01% SDS的1X转膜缓冲液进行转印。
•甲醇可去除SDS-蛋白质复合物中的SDS，促进蛋白质与膜的结合，但对凝胶本身有一些不良影响，会降低转印效率。甲醇可能导致孔径减小、某些蛋白质发生沉淀以及一些碱性蛋白质带正电荷或变为中性。应确保转膜缓冲液的甲醇浓度不高于10–20%，并使用高质量的分析级甲醇。

我在Tris-甘氨酸凝胶上使用了一种预染标准品，发现蛋白质的分子量与在NuPAGE Bis-Tris凝胶上的分子量不同。这是什么原因？

预染标准品具有与每种蛋白质共价结合的染料，这将导致标准品在不同的缓冲系统（即不同的凝胶）中迁移率不同。因此，使用预染标准品进行分子量估算将仅得出蛋白质的表观分子量。预染标准品可用于分子量估算、确认凝胶迁移和估算转膜效率，但对于需要精确估算分子量的应用，应使用非预染标准品。

我使用了你们的一种蛋白质标准品，并在泳道中看到了一些额外的条带。可以提供一些建议吗？

•上样时，请注意确保相邻样品泳道没有交叉污染。
•确保每个泳道上标准品的量都是正确的。蛋白质上样过多会导致产生额外的条带，这个问题在使用银染凝胶时尤为突出。
•标准品储存不当或反复冻融会导致蛋白质降解。

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