PageRuler™ 高分子量未染色蛋白分子量标准
PageRuler™ 高分子量未染色蛋白分子量标准
Thermo Scientific™

PageRuler™ 高分子量未染色蛋白分子量标准

Thermo Scientific PageRuler 高分子量未染色蛋白分子量标准是八 (8) 种未染色蛋白(60 至 250 kDa了解更多信息
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Thermo Scientific PageRuler 高分子量未染色蛋白分子量标准是八 (8) 种未染色蛋白(60 至 250 kDa)的混合物,可用作蛋白电泳 (SDS-PAGE) 和蛋白免疫印迹中的分子量标准品。

PageRuler 高分子量未染色蛋白分子量标准的特点:

大小范围— 8 种蛋白,分子量范围为 60 至 250 kDa
即用型—在上样缓冲液中提供,可直接上样至凝胶
明显条带—使用 Coomassie 或染色剂进行检测,具有出色的准确度
参比条带— 150 kDa 条带颜色较深,便于定向
标记—在分子量标准中的每个蛋白包含一个完整的 Strep-tag™ II 序列
经检测质量—各批次通过 SDS-PAGE 和 Western 印迹进行评价

当通过 SDS-PAGE 分析并用 Coomassie 染料或银染色时,此分子量标准中的蛋白分子量标准分解为可清晰识别的明显条带。150 kDa 条带颜色较深,可用作参比条带。蛋白可通过丽春红 S、Coomassie 或其他蛋白染色剂在 Western 印迹上检测。此外,分子量标准蛋白还包含一个完整的 Step-tag™ II 序列,可以通过 Strep-Tactin™ 偶联物在蛋白免疫印迹上检测到。PageRuler 高分子量未染色蛋白分子量标准为即用型产品:使用前无需加热、稀释或添加还原剂。

内含:
• 溶于 62.5 mM Tris-H3PO4(25°C 下 pH 值 7.5)的蛋白溶液(每种蛋白 0.02 至 0.05 mg/mL)、1 mM EDTA、2% SDS、100 mM DTT、1 mM NaN3、0.01% 溴酚蓝和 33% 甘油

应用:
• 在 SDS-聚丙烯酰胺凝胶和蛋白免疫印迹上精确测定蛋白大小。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
适用于(应用)Tris-acetate gels
凝胶兼容性Bolt™ Bis-Tris Plus 凝胶、Novex™ Tricine 凝胶、Novex™ Tris-甘氨酸凝胶、NuPAGE™ Bis-Tris 凝胶、NuPAGE™ Tris-醋酸盐凝胶、SDS-PAGE 凝胶
分子量250、200、150、120、100、85、70、60 kDa
产品线PageRuler™
产品类型蛋白分子量标准品
数量2 x 250μL
即用型
推荐应用Tris-醋酸盐凝胶
运输条件经批准可置于湿冰或干冰上运输
染色剂类型非预染蛋白Marker
系统类型Western 印迹,SDS-PAGE
标记物数量8
大小范围60-250 kDa
Unit SizeEach
内容与储存
接收后,在 -20°C 下储存。产品在冰袋上运输。

常见问题解答 (FAQ)

我使用了你们的一种Thermo Scientific PageRuler 非预染蛋白质分子量标准品,这些条带没有很好地分离。可能是什么原因造成的?

以下是一些可能的原因和解决方案:

- 样品被煮沸: 丢弃煮沸的样品。
- 使用的分子量标准品体积过大:加入较少的体积或使用前用蛋白质上样缓冲液稀释分子量标准品。
- 储存缓冲液中的DTT氧化:加入新制备的DTT溶液使最终浓度达到100mM。

我使用了你们的一种蛋白质标准品进行转印,发现一些小分子蛋白质条带穿过了膜。我该如何解决这个问题?

•降低电压、电流或缩短转印时间
•确保转膜缓冲液的甲醇浓度合适;可使用浓度为10–20%的甲醇,从而去除SDS-蛋白质复合物中的SDS,并促进蛋白质与膜的结合。
•确保转膜缓冲液的SDS浓度合适(若加入了SDS),SDS浓度不要超过0.02–0.04%。过多的SDS会阻碍蛋白质与膜的结合。过多的SDS会阻碍蛋白质与膜的结合。
•检查膜的孔径和靶标蛋白质的大小。小于10kDa的蛋白质很容易穿过0.45μm孔径的膜。如果您的目标蛋白质小于10 kDa,那么最好使用0.2μm孔径的膜。

我使用了你们的一种蛋白质标准品进行转印,发现一些高分子蛋白质条带转印到膜上的效果很差。可以提供一些提示吗?

•增加电压、电流或转印时间
•凝胶和SDS-蛋白质复合物中的SDS会促进蛋白质从凝胶中洗脱,但抑制蛋白质与膜的结合。这种抑制作用在硝化纤维素膜上的强度大于PVDF膜。对于难以从凝胶中洗脱的蛋白质,如大分子量蛋白质,可在转膜缓冲液中加入少量SDS以改善转印效果。我们建议在组装三明治前将凝胶置于含0.02–0.04% SDS的2x转膜缓冲液(无甲醇)中预平衡10分钟,然后使用含10%甲醇和0.01% SDS的1X转膜缓冲液进行转印。
•甲醇可去除SDS-蛋白质复合物中的SDS,促进蛋白质与膜的结合,但对凝胶本身有一些不良影响,会降低转印效率。甲醇可能导致孔径减小、某些蛋白质发生沉淀以及一些碱性蛋白质带正电荷或变为中性。应确保转膜缓冲液的甲醇浓度不高于10–20%,并使用高质量的分析级甲醇。

我在Tris-甘氨酸凝胶上使用了一种预染标准品,发现蛋白质的分子量与在NuPAGE Bis-Tris凝胶上的分子量不同。这是什么原因?

预染标准品具有与每种蛋白质共价结合的染料,这将导致标准品在不同的缓冲系统(即不同的凝胶)中迁移率不同。因此,使用预染标准品进行分子量估算将仅得出蛋白质的表观分子量。预染标准品可用于分子量估算、确认凝胶迁移和估算转膜效率,但对于需要精确估算分子量的应用,应使用非预染标准品。

我使用了你们的一种蛋白质标准品,并在泳道中看到了一些额外的条带。可以提供一些建议吗?

•上样时,请注意确保相邻样品泳道没有交叉污染。
•确保每个泳道上标准品的量都是正确的。蛋白质上样过多会导致产生额外的条带,这个问题在使用银染凝胶时尤为突出。
•标准品储存不当或反复冻融会导致蛋白质降解。