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请查看以下可能原因: •溶液太粘稠。 •蛋白质间相互作用导致磁珠聚集。 尝试以下建议: •延长分离时间(将管子留在磁力架上2-5分钟)。 •向裂解液中加入DNase I(约0.01 mg/mL)。 •将结合和/或清洗缓冲液中的Tween20浓度增加至约0.05%。 •向结合和/或清洗缓冲液中加入最多至20 mM 的β-巯基乙醇。
Dynabeads SILANE病毒核酸试剂盒可结合基因组DNA和病毒核酸。但是,该缓冲液已经过优化,对较短片段和非常少量的病毒DNA/RNA的结合能力更强。不建议将该缓冲液用于基因组DNA的结合,因为基因组DNA与磁珠表面的相互作用会更强,导致洗脱基因组DNA比洗脱病毒核酸更难操作。
不一定。如果您想要分离完整的核小体(组蛋白+DNA复合物),则不能使用Dynabeads SILANE磁珠。但是,如果DNA和核小体是非交联的,则可使用该磁珠从核小体中分离DNA。对于染色质免疫沉淀,可考虑使用MAGnify染色质免疫沉淀系统。
得率取决于样本中有核细胞的数量。1单位(200 µL)Dynabeads DNA DIRECT通用试剂盒可从每个样本中分离至少200 ng高质量、可立即用于PCR的基因组DNA,可供10次PCR反应使用。应调整样本大小至与Dynabeads磁珠的结合能力匹配。常规的起始样本为10,000个培养细胞或10 µL血液。可调整实验方案,以应用于30 µL血液样本,供30-50次下游PCR扩增(600 ng至1 µg DNA)使用。
对于小于1 kb的生物素标记DNA,我们推荐使用Dynabeads M270链霉亲和素磁珠和MyOne C1磁珠。对于大于1kb的双链DNA分子,我们推荐Dynabeads KilobaseBINDER试剂盒。KilobaseBINDER试剂包括M-280链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠和一种含有专利的固定活化剂的结合液,可结合较长的生物素化DNA分子以进行分离。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/immobilisation-of-long-biotinylated-dna-fragments.html),查看关于长的生物素化DNA片段分离的更多信息。