BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒
BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒
Applied Biosystems™

BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒

BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒可为 DNA 测序反应提供快速、简单的纯化方法,用于去除未结合的 BigDye™ 终止子和盐离子。再也没有染料团!纯化过程可在 40了解更多信息
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BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒可为 DNA 测序反应提供快速、简单的纯化方法,用于去除未结合的 BigDye™ 终止子和盐离子。再也没有染料团!纯化过程可在 40 分钟内完成,而手工操作时间一般短于 10 分钟。

• 只需使用一块孔板–无需进行移液操作。
• 可完全去除染料团。
• 在分析前稳定样品。
• 改善您的测序流程。
•采用手动或自动协议。
• 快速获取可靠、可重复的结果。

简单的纯化过程
传统的纯化方法(如乙醇沉淀)需要添加多种试剂,还需要进行倾倒和离心步骤。BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒只需加入两种试剂,而该两种试剂可以依次添加或预混合:

• XTerminator™ 溶液 – 可清除测序后反应中未结合的染料终止子和游离盐离子。
• SAM™ 溶液 – 可提高 Xterminator™ 溶液的性能,稳定纯化后反应。

实验方案非常简单(见图 1):
1.使用 BigDye™ 终止子执行循环测序。
2.循环测序后,对反应板进行短暂离心,然后用移液器将正确体积的 SAM™ 溶液吸取至每个板孔中。
3.用移液器将正确体积的 XTerminator™ 溶液吸取至各个孔中:
4.短暂地涡旋振荡 XTerminator™ 溶液散装容器。
5.使用大口径移液器吸头(推荐的大口径吸头)将正确体积的液体吸取至每个板孔中
6.使用热封板膜或透明粘性封板膜 (P⁄N 4306311) 将板密封。涡旋振荡 30 分钟(推荐的 96 孔微孔板涡旋仪和 384 孔微孔板涡旋仪),然后对反应板进行短暂离心。
7.将反应板放入 Applied Biosystems DNA 分析仪中。选择运行模块和运行板。

极高的长片段回收率
使用 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒时,对序列长度毫无影响。’图 2 显示了由加拿大萨斯卡通植物生物技术研究院 (NRC-PBI) 的 DNA 技术单位提供的数据。Q20 碱基读长 = 1044 bp。

短片段回收率提高
使用 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒可获得更高质量的数据。图 3 显示了 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒与在加拿大萨斯卡通植物生物技术研究院 (NRC-PBI) 的 DNA 技术单位进行的基于乙醇沉淀的纯化之间的结果比较。BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒可实现极高的短片段回收率。乙醇纯化所产生的序列数据被染料团破坏。

稳定性提高
密封的反应板在室温下可稳定保存 48 小时,在 4°C 下则可保存 10 小时。若发生电源中断和计算机故障等情况,您可以重新运行同一份样品,而无需重复进行实验。这样可以提高在 CE 仪器上加载反应板的操作灵活性。

运行可用模块
Applied Biosystems 提供可下载的运行模块,可与 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒和数据采集软件配合使用。这些模块设计用于 3100、3100–Avant(带数据采集 v2.0 或更高版本软件)、3130⁄3130xl,以及 3730⁄3730xl 分析仪。用于 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒的软件模块兼容 Windows™ 2000 和 Windows™ XP 操作系统,可从我们的软件下载页面获取:

用于基因分析的 Applied Biosystems 集成系统›

仅供研究使用。不适用于诊断用途。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
最终产品类型片段文库、PCR 扩增子、cDNA 文库、寡核苷酸 (DNA)、cDNA
适用于(应用)测序
包括2瓶
产品线BigDye XTerminator™,BigDye™
数量1000 次制备
样品类型测序产品
运输条件湿冰
原始材料量10 μL
靶标测序反应
测试时间40分钟
产品规格试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存
20 mL XTerminator™ 溶液(在 4°C 下储存), 90 mL SAM™ 溶液(在室温或 4°C 下储存)

常见问题解答 (FAQ)

Can I store samples in BigDye Xterminator solution? If so, what is the optimal temperature, and for how long can I store it?

Yes, after cleaning the sequencing product using the BigDye XTerminator Purification Kit, the end product can be stored up to 10 days at either 4°C or –20°C.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Capillary Electrophoresis Applications Support Center.

What is a dye blob?

After the cycle sequencing reaction is complete, unincorporated ddNTPs can form complexes that migrate more slowly than individual ddNTPs would. These complexes can interfere with electrokinetic injection, electrophoretic separation, and data analysis. In the electropherogram these can be observed as a region containing multicolored peaks of varying sizes or blobs, depending on the efficiency of the cleanup. In BigDyeTerminator v3.1 reactions, these blobs may appear around 70–80 bp and, in severe cases, 110–120 bp. For BigDye Terminator v1.1, the blobs will either migrate ahead of the data collection time (so they will not be visible) or they may be visible at the very beginning of the run.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Capillary Electrophoresis Applications Support Center.

What are the different ways to clean up my sequencing reactions?

While there are many kits and methods available to clean up the extension products from a sequencing reaction, the ones that Thermo Fisher Scientific has formally tested and recommends are:

•BigDye XTerminator Purification Kit
•Ethanol precipitation
•Spin column/plate purification (e.g. Centri-Sep columns, DTR Kits from Edge Biosystems)

A list of alternative methods for purification is available in the DNA Sequencing by Capillary Electrophoresis: Applied Biosystems Chemistry Guide: Second Edition (Cat. No. 4305080, Rev. C, page 119). The guide can be found by searching the Thermo Fisher Scientific website with the Cat. No. 4305080.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Capillary Electrophoresis Applications Support Center.

Does the BigDye XTerminator (including SAM Solution) contain any aerosols?

The BigDye Xterminator Solution and SAM Solution do not contain aerosols.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Nucleic Acid Purification and Analysis Support Center.

What kit do you recommend for cleanup of the cycle sequencing reaction?

For the purification of the sequencing reaction, we recommend the BigDye Xterminator Purification Kit. For reference, the following is the link to the BigDye Xterminator Purification Kit User Guide.

Additionally, our Sanger Sequencing Guide has additional recommendations starting on page 68 for purifying the sequencing reaction.