Fast SYBR™ Green Cells-to-CT™ 试剂盒
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Fast SYBR™ Green Cells-to-CT™ 试剂盒

Green features
Ambion™ Fast SYBR™ Green Cells-to-CT™ 试剂盒是快速、简单且可靠的方法,直接从培养细胞中获取实时荧光定量 PCR 结果。这种突破性的细胞裂解和了解更多信息
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货号反应次数
4402957400次反应
4402956100 次反应
货号 4402957
价格(CNY)
56,769.00
Each
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反应次数:
400次反应
价格(CNY)
56,769.00
Each
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Ambion™ Fast SYBR™ Green Cells-to-CT™ 试剂盒是快速、简单且可靠的方法,直接从培养细胞中获取实时荧光定量 PCR 结果。这种突破性的细胞裂解和 RNA 稳定技术完全省去了耗时费力的 RNA 纯化过程。该试剂盒的试剂足够用于400次反应。Fast SYBR™ Green Cells-to-CT™ 试剂盒含有 AmpliTaq™ Fast DNA 聚合酶 UP,可实现即时热启动,因此可采用快速实时荧光定量 PCR 减少非特异性产物的形成。

•包括优化试剂,高效、即时使用
•简单、高效的 Cells-to-CT™ 技术在室温下不到7分钟即可制得样品,包括 DNase 处理
•在10至100,000个细胞/样品范围内具有经验证的准确性、出色的重现性和较高的灵敏度;结果与纯化 RNA 相当

非凡价值
试剂盒包括用于样品制备的试剂,能够整合至完整、优化的基因表达工作流程中,包括逆转录试剂和与 SYBR™ Green 的高性能 PCR 预混液。

极其简单
方案从简单的7分钟样品制备程序开始。首先,用 PBS 洗涤细胞,然后在室温下裂解5分钟;同时进行 DNase 处理。裂解反应停止,然后样品可用于逆转录或在 –20°C 下储存长达5个月。由于直接在培养板(96或384孔)上处理样品,样品处理和样品丢失或转移错误可能性降至较低水平,从而获得更高的重现性。样品制备后,将一部分细胞裂解物加入到 RT 反应中,然后使用所含预混液进行实时荧光定量 PCR。

卓越性能
为证明试剂盒的性能,使用传统 RNA 纯化和实时荧光定量 PCR 分析或 Fast SYBR™ Green Cells-to-CT™ 试剂盒进行重复实验。该试剂盒的性能与使用纯化 RNA 分析10至100,000个细胞获得的结果相当。此外,灵敏度、效率和动态范围也优于同类裂解试剂盒。使用试剂盒制备的样品已在各种实时荧光定量 PCR 平台(包括来自 Applied Biosystems™、Roche 和 Bio-Rad 的平台)上进行兼容性检测。

辅助产品:
SYBR™ Green Cells-to-CT™ 对照试剂盒 (SKU# 4402959) 包含 Xeno™ RNA 对照和引物集,建议用于监测 Cells-to-CT™ 反应中细胞裂解和扩增抑制的效率。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
适用于(设备)7500 Fast 系统、7900HT Fast 系统、StepOne™、Fast 模式、StepOnePlus™、Fast 模式
环保功能所用资源更少、废弃物更少、危害更小
热启动内置热启动
反应次数400次反应
参比荧光染料ROX(预混)
聚合酶AmpliTaq 快速 DNA 聚合酶
产品线Cells-to-CT™、SYBR™
纯化时间5 min。
纯度或质量等级UP (Ultra Pure)
数量400次反应
逆转录酶M-MLV
样品类型细胞
运输条件干冰
最大浓度20X
检测方法SYBR
适用于(应用)RT-PCR
标签或染料SYBR Green
反应速度快速
Unit SizeEach
内容与储存
将终止液、DNase I 和 20X RT 酶混合物储存在 -20°C 下。将裂解液、2X SYBR™RT 缓冲液、Fast SYBR™Green PCR 预混液储存在 4°C 下。将无核酸酶水储存在室温下。

常见问题解答 (FAQ)

完成Cells-to-CT实验后,在没有反转录的阴性对照中出现PCR产物。这表示什么?

如果在没有反转录的阴性对照反应中出现PCR产物,而非无模板对照中,则表示RNA样品中仍存在基因组DNA,并且在实时PCR中扩增了基因组DNA。请参考以下建议:

•确保DNase I完全混入裂解液中。
•减少每次裂解反应的细胞用量。
•使用室温下的裂解液裂解细胞,确保裂解反应在室温下发生。

也可尝试延长裂解反应的孵育时间至8分钟,和/或使用已经升温至25°C的裂解液裂解细胞。

完成Cells-to-CT实验后,在无模板PCR对照中出现PCR产物。可能有哪些原因?

在无模板PCR对照中出现PCR产物,表示存在DNA污染。为控制污染,需要采取更为严格的步骤。

进行了Cells-to-CT实验之后我没获得PCR产物或获得了预期之外的PCR产物。可能有哪些原因?

请查看以下可能原因和建议:

•加入和混合终止液出现问题:确保将终止液直接加入到裂解物中。如果裂解液的成分未完全灭活,可能会抑制RT-PCR。
•RNA发生降解:开始细胞裂解步骤前,将细胞保存在PBS中并置于冰上。
•样品中的RNase未完全灭活:可能使用了过多细胞或细胞中加入过多PBS,稀释了裂解液。
•样品在恢复到室温前放置太久:加入终止液后,不要将裂解物放置在室温超过20分钟。
•样品不含目标RNA:通过使用样品中的XenoRNAControl确认操作流程是否正常。同时,应确认PCR引物能够在您所使用的PCR条件下扩增目标分子。

Cells-to-CT实验中的终止液用完了。能否单独购买?

可以,该产品具有1mL分装形式(货号 4402960)。

我的Cells-to-CT反应中有基因组DNA污染,该如何除去污染?

1.确保从孔中移去了所有培养基。
2.移去培养基后,使用相同体积的室温1X PBS洗涤。
3.确保反应在室温下发生(如果将反应板置于冰上、将反应板快速转移至实验台或使用了冰冷的裂解液,则裂解反应可能不会达到室温)。
4.将裂解液恢复至室温后,再加入到细胞。
5.使裂解反应在25°C下持续8分钟。