Cells-to-C_T™ 终止液

如果在没有反转录的阴性对照反应中出现PCR产物，而非无模板对照中，则表示RNA样品中仍存在基因组DNA，并且在实时PCR中扩增了基因组DNA。请参考以下建议：

•确保DNase I完全混入裂解液中。
•减少每次裂解反应的细胞用量。
•使用室温下的裂解液裂解细胞，确保裂解反应在室温下发生。

也可尝试延长裂解反应的孵育时间至8分钟，和/或使用已经升温至25°C的裂解液裂解细胞。

在无模板PCR对照中出现PCR产物，表示存在DNA污染。为控制污染，需要采取更为严格的步骤。

请查看以下可能原因和建议：

•加入和混合终止液出现问题：确保将终止液直接加入到裂解物中。如果裂解液的成分未完全灭活，可能会抑制RT-PCR。
•RNA发生降解：开始细胞裂解步骤前，将细胞保存在PBS中并置于冰上。
•样品中的RNase未完全灭活：可能使用了过多细胞或细胞中加入过多PBS，稀释了裂解液。
•样品在恢复到室温前放置太久：加入终止液后，不要将裂解物放置在室温超过20分钟。
•样品不含目标RNA：通过使用样品中的XenoRNAControl确认操作流程是否正常。同时，应确认PCR引物能够在您所使用的PCR条件下扩增目标分子。

可以，该产品具有1mL分装形式（货号 4402960）。

1.确保从孔中移去了所有培养基。
2.移去培养基后，使用相同体积的室温1X PBS洗涤。
3.确保反应在室温下发生（如果将反应板置于冰上、将反应板快速转移至实验台或使用了冰冷的裂解液，则裂解反应可能不会达到室温）。
4.将裂解液恢复至室温后，再加入到细胞。
5.使裂解反应在25°C下持续8分钟。