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Invitrogen™

Silencer™ Select GAPDH siRNA

Ambion™ Silencer™ SelectGAPDH Positive Control siRNA, In Vivo Ready is extensively validated and an ideal control for many aspects of an siRNA experiment.
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货号数量
4404024250 nmol
货号 4404024
价格(CNY)
39,714.00
Each
数量:
250 nmol
价格(CNY)
39,714.00
Each
Ambion™ Silencer™ SelectGAPDH 阳性对照 siRNA (In Vivo Ready) 经过广泛验证,是 siRNA 实验许多方面的理想对照品。该对照品可根据动物的需要进行高度纯化。提供 250 nmol。

•优质 siRNA,高度纯化且可直接使用
• 在多种常见细胞系中进行了功能性测试
• 包括 Silencer™ Select 修饰以增强特异性
• 可用于人、小鼠和大鼠细胞

Silencer™ Select siRNA 是什么?
Silencer™ Select siRNA 整合了 siRNA 设计、脱靶效应预测算法和化学修饰等诸多领域较新的进步成果,以产生具有卓越效果、效力和特异性的 siRNA。结果是极少实验由于沉默不良而失败,且表型数据更纯净、更一致。

Silencer™ Select GAPDH 阳性对照 siRNA:
Silencer™ SelectGAPDH 阳性对照品经过广泛验证,是刚开始 siRNA 实验的人员的理想测试 siRNA,因为已确认它可用于多种细胞系。“”由于其靶向 GAPDH mRNA(常见的内部对照品),许多试验可用于测量其影响,包括实时 RT-PCR 和 Ambion™ KDalert™ GAPDH 检测试剂盒。

质量控制:
Silencer™ Select siRNA 在最高质量标准下在最先进的设施中生产。严格的质量控制程序包括 MALDI-TOF 质谱分析和分析型 HPLC,以监测纯度。此外、还通过凝胶电泳评估了每一个 siRNA、以确认链正确退火。此外,In Vivo Ready siRNA 还经过额外的纯化,通过半透膜来去除多余的盐。随后进行无菌过滤和内毒素检测。通过去离子水配制成 50 µM 浓度时,In Vivo Ready siRNA 中含有 <0.6 mM Na+、<2.0 mM K+ 和 <0.1 mM Mg2+Silencer™ Select siRNA 对照品具有特异性化学修饰;设计用于与 Silencer™ Select siRNA 一起使用。如果您正在使用其他 siRNA 产品(如 BLOCK-iT™ siRNA、Ambion™ Silencer™ siRNA 或 STEALTH RNAi™ siRNA),我们建议您使用设计与这些 siRNA 配合使用的对照 siRNA,以便获得更可靠的实验结果。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
标签或染料未偶联
产品线Silencer Select、Ambion
产品类型siRNA
纯度HPLC
数量250 nmol
运输条件室温
控制类型基因抑制阳性对照
RNAi 类型siRNA
目标GAPDH
Unit SizeEach
内容与储存
该 siRNA 在单个试管中以干粉形式提供,应在 –20°C 下储存。

常见问题解答 (FAQ)

使用载体介导的RNAi技术有什么优势?

载体介导的技术使您能够:

•实现瞬时或稳定的靶点敲低
•在所有细胞类型中实现RNAi,甚至是难转染、原代和不分裂细胞
•通过siRNA的诱导表达,调控基因抑制效应
•可以筛选稳定表达某个siRNA序列的单一细胞群
•利用组织特异性启动子控制体内基因表达

我的细胞为何在转染后快要死了?

我们建议进行一个转染试剂对照实验,确定您的细胞是否对转染试剂敏感。此外,您可以尝试其他细胞密度和siRNA浓度以减少转染本身的毒性。

我转染了siRNA并且mRNA水平降低了,但是蛋白水平没有降低,这是什么原因所致?

在一些情况下,即使mRNA已经被敲低,蛋白的敲低效果也会受蛋白降解速率等其他变量的影响。另外,相比于mRNA,蛋白可能需要更长的时间才能看到敲低效果。

我的目的基因没有被敲低,可能的原因有哪些?

请参考以下可能的原因和建议:

•您测试了多少个siRNA?有任何敲低效果吗?如果所有siRNA都没有敲低效果(<10%),那么可能是检测方法本身的问题。试试使用其他qRT-PCR assay评估敲低效果。
•qRT-PCRassay的靶位点和siRNA切割位点的相对位置如何?如果两者相差3,000碱基以上,问题可能是其它剪接转录本的存在造成的。
•实验的Ct值是多少?在40循环的qRT-PCR实验中它们应该低于35。
•您确定siRNA转染进入细胞中了吗?我们建议使用一个经过验证的阳性对照siRNA来检查转染效率。

我的siRNA没有获得任何基因敲低效果,对此您有何建议?

请参考以下可能的原因和建议:

•是检测的mRNA水平吗?最可靠的方法是实时PCR。在一些情况下,即使mRNA已经被敲低,蛋白的敲低效果也可能会受蛋白降解速率等其它变量的影响。
•RNA是如何提取的?检测提取的RNA的质量了吗?应确保RNA没有降解。
•使用阳性对照了吗?这可以帮助确定试剂是否有效以及siRNA是否被正确递送进细胞。请在进行实验的同时使用阳性对照siRNA。
•使用转染对照了吗?被转染细胞的百分比是多少?
•进行不同时间的检测了吗?通常,基因沉默可以早在转染后24小时测定。但是,基因敲低的持续时间和程度取决于所用的细胞类型和siRNA的浓度。
•优化过转染条件吗?您可以尝试使用不同的细胞密度和siRNA浓度。
•您使用了多大浓度的siRNA?我们建议测试 5 nM到100 nM之间的多个浓度。