ViralSEQ™ 鼠细小病毒 (MMV) 检测系统

Applied Biosystems ViralSEQ 鼠细小病毒（Mouse Minute Virus，以下简称 MMV）检测试剂盒是一种基于 DNA 纯化和实时荧光定量 PCR 的集成系统的组成部分，用于在多种样本类型中快速、高灵敏地检测 MMV。使用 PrepSEQ 1-2-3 核酸提取试剂盒（单独销售）从样本中分离病毒 DNA。然后使用 TaqMan 实时荧光定量 PCR 技术进行高灵敏度高特异性的病毒 DNA 检测。该试剂盒含有专利性的阳性对照分子，从而消除了因待检样本无意中受到阳性对照污染而产生假阳性结果的可能。

高特异性，快速出结果
ViralSEQ MMV 试剂盒检测四种已知的 MMV 菌株：i、p、m 和 c，包括 NCBI 数据库中报告的7种基因组序列。表1显示 ViralSEQ MMV 试剂盒具有特异性且未与非相关 DNA 发生交叉反应。该试剂盒的操作流程简单容易，可在4小时内出结果（图1）。

简化监督和早期检测流程
ViralSEQ MMV 检测试剂盒是细胞培养快速检测计划的一部分，旨在简化基于哺乳动物细胞培养的生物制药生产过程中3种常见污染物的检测流程（图2）。该计划建立了生产效率和产品质量方面新的流程标准，在一个仪器平台上，结合一步样本制备法和基于实时定量 PCR 技术的试剂盒以检测支原体、水疱疹病毒和 MMV。

结果可靠
ViralSEQ MMV 检测试剂盒包括 MMV 差别性阳性/提取物对照，这是一种含有 MMV DNA 序列的质粒 DNA，可被 MMV 检测试剂盒（FAM 探针）识别。在流程的样本制备和检测部分，该对照品（图3）旨在模仿 MMV DNA 的行为。此外，该对照品采用额外的 VIC 探针连接序列设计。PCR 反应中出现的 FAM 和 VIC 信号都可用于从 MMV (FAM) 和对照 DNA（FAM 和 VIC）中区分出阳性检测结果。该新型对照方法让我们能够进行无风险的 DNA 加标对照试验，消除了因待检样本意外地受到阳性对照 DNA 的交叉污染而产生假阳性检测结果的可能。

低水平检测
ViralSEQ MMV 检测试剂盒采用经证实的 TaqMan 技术，灵敏度很高，能够检测每轮 PCR 反应中低至10个拷贝的 MMV 基因组 DNA（病毒颗粒相当于0.002 TCID50）。MMV 基因组 DNA 的10倍连续稀释分析显示该试剂盒动态范围宽、检验效率（图4和5）。

出色的样本制备方法
PrepSEQ 1-2-3 核酸提取试剂盒（单独销售）用于从中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamsters Ovary，以下简称 CHO 细胞）培养物和牛血清等多种复杂的样本类型中一致高效地回收 MMV 基因组 DNA 样本。图6表明，加标样本中提取的 DNA 的 Ct 值与实时荧光定量 PCR 反应扩增的非加标对照组的 Ct 值相等，从而证实使用 PrepSEQ 1-2-3 试剂盒能够高效地回收 DNA。