用于 qPCR 的稳定型 Blood-to-CT™ 核酸制备试剂盒可与 PAXgene™ 血液 RNA 管兼容
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用于 qPCR 的稳定型 Blood-to-CT™ 核酸制备试剂盒可与 PAXgene™ 血液 RNA 管兼容

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用于 qPCR 的稳定型 Blood-to-CT™ 核酸制备试剂盒使得研究人员能够使用直接收集到 PAXgene™ 血液 RNA 管中的 500 µl 人全血等份试液进行表达分析,无需进行传统 RNA 纯化。这一简单程序可产生能够直接进入逆转录和实时荧光定量 PCR 分析的裂解物,且其灵敏度和特异性与传统纯化 RNA 相当。该试剂盒可节省时间、减少浪费、提供适用于少量样品的简单工作流程,也可轻松整合至自动化高通量应用。

•从 PAXgene™ 血液 RNA 管中检测总 RNA(包括 miRNA),无需纯化
•快速—在不足 1 小时的时间内制备 96 份样品用于基于 TaqMan™ 的实时 RT-PCR 分析
•稳健—可在室温下处理 500 µl 样品,结果与使用纯化 RNA 获得的结果相当
•规格灵活—可在微量离心管或者手动⁄自动 96 孔板中制备样品

工作流程简单且不会牺牲灵敏度&特异性
该过程包括从血液管中沉淀和洗涤 500 uL 等份试液然后采取独特的酶切⁄DNase 步骤以保持 RNA 完整性。与需要特定温度孵育步骤的其他产品不同,制备过程完全在室温下进行。可在不到一小时的时间内制备多达 96 份样品,该时间为使用竞争对手的离心柱纯化处理 12 份样品所需时间的一半,且需要的手动操作更少。所得裂解物可直接进入一步或两步法 qRT-PCR 反应或储存以供后续使用(在 4°C 下可储存 1 小时,冷冻条件下可储存 5 个月)。从开始到结束,这一简单的程序均在相同的样品处理孔中进行,这意味着未进行样品转移。从裂解物中生成的实时 RT-PCR 数据与使用从相同试管中常规纯化的 RNA 时获得的结果相同,并已使用以下 qPCR 试剂进行了验证:

•Applied Biosystems’ 高容量 RNA-to-cDNA™ 试剂盒和 TaqMan™ 基因表达预混液
•Invitrogen’ SuperScript™ VILO™ cDNA 合成试剂盒和 TaqMan™ 基因表达预混液
• Applied Biosystems’ TaqMan™ MicroRNA 逆转录试剂盒和 TaqMan™ 通用预混液 II
• Applied Biosystems’ TaqMan™ 一步法 RT-PCR 预混液试剂盒
用于 cDNA 合成的逆转录试剂、TaqMan™ 预混液和用于实时荧光定量 PCR 分析的 TaqMan™ 检测试剂可单独出售,且不包括在试剂盒内。

可使用一份起始样品进行的逆转录和 PCR 反应的总数量取决于期望 RT-PCR 试剂盒的下限样品要求。有关更多详细信息,请参见用户文件。

筛选、发现或验证
对于具有特定目的基因的用户,用于 qPCR 的稳定型 Blood-to-CT™ 核酸制备试剂盒设计用于从少量起始样品中快速筛选(每份样品约为正确填充的 PAXgene™ 血液 RNA 管总体积的 5%)。血液管中的剩余物可进行存档供以后使用或纯化(根据需要)。

借助用于 qPCR 的稳定型 Blood-to-CT™ 核酸制备试剂盒,使用实时 RT-PCR 分析进行发现或验证实验的用户可以节省精力、时间和总成本,且采用可扩展流程使得受常规纯化瓶颈限制的实验室能够轻松处理样品–。

miRNA 分析
随着人们越来越关注非编码 RNA 及其在发育和疾病领域的调节作用,借助用于 qPCR 的稳定型 Blood-to-CT™ 核酸制备试剂盒可正确检测这些较小但很重要的 RNA 分子,了解到这一点让我们感到安心。科学家已使用 Applied Biosystems TaqMan™ MicroRNA 逆转录试剂盒和 TaqMan™ 通用预混液 II 针对大量 TaqMan™ microRNA 测定试剂盒进行了裂解物检测,得到的结果与领先竞争者的 miRNA 纯化产品相当或更好。

减少占用空间和减少废弃物 = 节省更多
对于竞争产品,特别是基于柱的方法,每份样品会产生大量塑料和生物危害性废弃物(离心柱、吸头、微量离心管和试剂)。用于 qPCR 的稳定型 Blood-to-CT™ 核酸制备试剂盒简化了工作流程,使得总塑料废弃物重量比通过柱处理的相当数量的样品低 75%。该试剂盒不会产生有机废物。其占地面积较小,可节省空间,并且能尽可能提高冰箱容量。减少有害废弃物处理和减少塑料消耗可节省成本,并减少环境影响。

对于需要完全纯化的用户如果仍需对剩余血液管进行常规 RNA 纯化,可以选择 MagMAX™ 稳定血液管 RNA 分离试剂盒。本产品使用经证实的磁珠法分离技术,可以尽可能提高从 PAXgene™ 血液 RNA 管中获得的总 RNA 得率(包括 miRNA)。

一站式购买:用于 qPCR 的稳定型 Blood-to-CT™ 核酸制备试剂盒与我们的成套产品(包括 RT 和 PCR 预混液(必须单独购买))兼容。简化订购流程,通过从一家供应商处购买更多产品来降低运费。

规格:
• 兼容性— PAXgene™ 血液 RNA 管
• 处理时间— 1 小时内
• 规格— 微量离心管、96 孔板
• 所需设备—带 96 孔板或微量离心管适配器和 96 孔板或微量离心管涡旋器的 5,000 x g 标准离心机
• 制备次数—200 次反应

注释:血液管、用于 cDNA 合成的逆转录试剂以及用于实时荧光定量 PCR 分析的 TaqMan™ 预混液单独出售。

仅供研究使用。不可用于诊断程序。

PAXgene™ 和 PreAnalytiX™ 是 PreAnalytiX GmbH 的注册商标。此处不默示任何赞助、认可或归属。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
色谱柱类型离心柱
最终产品类型裂解物
适用于(应用)实时荧光定量 PCR (qPCR)
环保功能所用资源更少,浪费减少,危害更小
高通量能力高通量兼容性、非高通量兼容性(手动)、自动化方案
PCR 方法1 步法 qRT-PCR、2 步法 qRT-PCR
产品线Ambion™、Blood-to-CT™
产品类型核酸制备试剂盒
数量200 次制备
样品类型血液
靶标裂解物、即用型实时荧光定量 PCR
测试时间< 1 h
产品规格试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存

Kit Components:
Box 1-Store at 4°C
• Digestion Solution, 20 mL
• PAXgene™ Wash, 300 mL

Box 2-Store at -20°C
• Stop Solution, 2 x 1 mL
• DNase 1, 200 μL

常见问题解答 (FAQ)

What can I do to improve the sensitivity of my qPCR assay?

If you are targeting a low-abundance gene, you may have trouble getting Ct values in a good, reliable range (Ct > 32). To increase the sensitivity of the assay, you may want to consider the following:

- Increase the amount of RNA input into your reverse transcription reaction, if possible
- Increase the amount of cDNA in your qPCR reaction (20% by volume max)
- Try a different reverse transcription kit, such as our SuperScript VILO Master Mix, for the highest cDNA yield possible
- Consider trying a one-step or Cells-to-CT type workflow (depending on your sample type)

How do I set the baseline for my qPCR experiment?

Most times your instrument software can automatically set a proper baseline for your data. Check out our short video, Understanding Baselines, for more information on how to set them (https://www.youtube.com/watch?feature=player_embedded&v=5BjFAJHW-bE).

How do I set the threshold for my qPCR experiment?

In most cases your instrument software can automatically set a proper threshold for your data. Check out our short video, Understanding Thresholds, for more information on how to set them (https://www.youtube.com/watch?feature=player_embedded&v=H_xsuRQIM9M).

I am not getting any amplification with my TaqMan Assay or SYBR Green primer set. What is causing this?

There could be several reasons for no amplification from an assay or primer set. Please see these examples and suggested solutions in our Real-Time Troubleshooting Tool (https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/qpcr-education/real-time-pcr-troubleshooting-tool/gene-expression-quantitation-troubleshooting/no-amplification.html) for more details.

I am getting amplification in my no-template control (NTC) wells in my qPCR experiment. What is causing this?

There could be several reasons for amplification in a NTC well. Please see these examples and suggested solutions in our Real-Time Troubleshooting Tool (https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/qpcr-education/real-time-pcr-troubleshooting-tool/gene-expression-quantitation-troubleshooting/amplification-no-template-control.html) for more details.