Single Cell-to-CT™ qRT-PCR 试剂盒

Ambion™ Single Cell-to-C_T™ 试剂盒包含一个经验证的完整工作流程，适用于对含 1–10 个细胞的样品进行基因表达分析。每个试剂盒包含用于样品制备、逆转录、预扩增和 qPCR 的试剂，其已在仅5个步骤的简单工作流程中一起优化（如图所示）。

主要产品特点：

•单细胞实时荧光定量 RT-PCR 的预优化工作流程
•单细胞分析的较高灵敏度
•性能和重现性优于替代方法
•全套试剂盒方便且易于执行方案

预优化方案可确保成功并节省时间
每个工作流程均从简单的7分钟样品制备开始，其中以极少的工艺将细胞有效、可重现地裂解为与下游 RT-PCR 兼容的溶液，无需纯化。随后使用 Superscript™ RT 进行逆转录，使用 TaqMan™ PreAmp 预混液扩增 cDNA，使用 TaqMan™ 基因表达预混液进行 qPCR。所有这四个步骤都可以提供较高灵敏度。在整个程序中，整个细胞样品保持在相同孔中，因此不存在可能影响灵敏度的宝贵有限材料的样品损失或稀释。

单细胞灵敏度
实时荧光定量 PCR 结果的灵敏度可能受样品制备、逆转录或扩增效率的影响。Single Cell-to-C_T™ 试剂盒已解决了这些潜在的问题领域，以创建一种能够以较大灵敏度对单个细胞进行可靠和稳健的基因表达分析的解决方案。使用 Single Cell-to-C_T™ 试剂盒检测单细胞当量表明，与具有出色技术重现性的100细胞样品对照品相比，qPCR 结果具有适当的线性和灵敏度（如图所示）。与预期一致，单个细胞因其固有的生物异质性而表现出了更大的变异性。此外，通过包含 cDNA 预扩增步骤，在实时荧光定量 PCR 之前准确扩增目标物。该关键步骤以无偏倚的方式增强信号，从而扩展有限样品的分析可能性。显示了使用预扩增的96基因检测组合的准确度和信号增强（如图所示）。

与替代方法相比，具有优异的性能和重现性
使用有机溶剂、玻璃纤维过滤柱或磁珠的传统样品制备方法不适用于单细胞分析，因为样品通过不完全 RNA 沉淀、结合和洗脱出现损失。此外，涉及简单煮沸以裂解细胞的大多数单细胞自行设计法缺乏灭活内源性 RNase 以稳定基因表达谱的能力，并可能导致 RNA 的化学裂解和抑制剂残留，包括 gDNA 污染，其可影响所有 qRT-PCR 应用。相比之下，与传统纯化或自行设计煮沸方法相比，Single Cell-to-C_T™ 试剂盒显示较高的单细胞分析灵敏度和重现性（参见图）。