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Cells-to-CT系统应该能适用于所有细胞系。但是,由于细胞大小和成分的差异,每个裂解反应的最大细胞数在不同细胞系中会有轻微差异。您可使用TaqMan对照试剂盒检测抑制和最小样品起始量。
裂解后样品可在室温下保存最多30分钟,加入终止液后可放置多至2小时。您可将细胞裂解液、cDNA和预扩增样品冻存,待后续处理。
在使用Snigle Cell-to-CT试剂盒时,由于单个细胞个体差异以及转录差异的存在,我们不建议使用内参对数据进行归一化处理。由于存在这种差异,归一化反而会人为增加计算出来的单个细胞基因表达水平和实际值的差异。
我们已经测试了将试剂反复冻融5-10次,发现对CT值无影响。裂解样品冻融多达5次,对基因表达数据无任何显著影响。
是的,使用对Megaplex Pool进行了修改的用于MicroRNA表达分析的操作方案(P/N 4399721 Rev. B)。在本方案中,对逆转录和预扩增反应进行体系放大以包括所有细胞裂解物。