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使用TaqMan miRNA Assay,您可以测定感兴趣的miRNA的水平。如果miRNA与转染进细胞的anti-miR和/或mirVana抑制物相结合,那么miRNA将不会被检测到,证明miRNA的有效失活。请注意,这仅适用于当提取的总RNA样本在加入RT引物时没有进行热变性的情况,因为热变性将导致复合体解体,这样即使细胞已被正确的转染,TaqMan miRNA Assay将仍能检测到miRNA。更多细节请参考TaqMan MicroRNA Cells-to-CT试剂盒(货号4391848)的实验方案。
模拟物和抑制物可以使用和siRNA相同的参数通过转染或电转进入细胞。 使用mirVana miRNA模拟物 为了后续应用,请使用一种对于您感兴趣的miRNA表达相对较低的细胞系。 • 转染时的细胞密度通常建议30–70%汇合度。 • 转染方法(传统转染或反式转染)。 • 细胞暴露于转染试剂-RNA寡核苷酸复合体的时长。 对于大部分miRNA模拟物而言,最大活性在转染后24小时候产生,但是生物检测实验可以在转染后24–72小时内进行。如果转染后的细胞培养超过24小时,我们建议更换新鲜的培液以便获得更好的细胞活力。 使用 mirVana miRNA抑制物分析内源miRNA功能 为了后续应用,请使用一种对于您感兴趣的miRNA表达相对较高的细胞系。 通用转染起始点 mirVana miRNA模拟物和抑制物通常在3–30 nM浓度转染时效果最好。优化实验可以包括1–100 nM的浓度范围。在准备转染复合体时,为提高精确性和可重复性,可以先稀释您的寡聚核苷酸储液,并加入较大体积的稀释后的溶液。
交货时间取决于纯化程度和是否是定制订单。请参考以下大致时间表(中国需要加上国际运输时间): 标准纯化(5 and 20 nmol) :4个工作日 HPLC/in vivo ready (250 nmol):15个工作日 定制mirVana抑制物和模拟物:15个工作日
是的,请将您未发表的miRNA序列提供给我们,我们可以合成一个相应的mirVana模拟物或抑制物,请点击此链接(https://www.thermofisher.com/order/custom-genomic-products/tools/mirna/)订购。
阴性对照的提供需要签署机密信息披露协议(confidential disclosure agreement),而目标序列的提供需要提供购买证明。