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Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒,不含感受态细胞

货号: 451245
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Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒,不含感受态细胞

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Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒可提供用时5分钟的高效一步克隆策略(TOPO™ 克隆),用于将使用校正读码耐热聚合酶扩增的平末端 PCR 产物直接插入至质粒载体。各试剂盒均具有包含用于阳性选择的 ccdB 基因的 Zero Blunt™ TOPO™ 载体(参见图),仅允许含重组体的质粒载体生长。根据您的需要和预算,您可选择含多种感受态细胞或不含感受态细胞的 Zero™ Blunt™ TOPO™ 试剂盒。Zero™ Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒特点:

快速且简便—从 PCR 至克隆仅需3步,手动操作时间短至5分钟
高效—可获得高达 95% 的含正确插入片段的克隆
久经考验—在过去十余年中性能可靠,引用次数超过4,000次
简单 —不需要连接酶、PCR 后程序或含有特异性序列的 PCR 引物。

Zero Blunt™ TOPO™ 克隆试剂盒—概述

载体:pCR™Blunt II-TOPO™ 载体—包含 ccdB 基因,可直接选择重组体

克隆方法:TOPO™ 克隆—使用校正读码耐热聚合酶扩增的平末端 PCR 产物基于拓扑异构酶 I 进行5分钟连接

感受态细胞:多种选择—从包含一般、高效、噬菌体 T1-抗性或快速生长型感受态细胞的试剂盒中选择或使用您的自有细胞。

设计用于校正读码聚合酶的 pCR™Blunt II-TOPO™ 载体—
pCR™Blunt II-TOPO™ 载体设计用于克隆由校正读码耐热聚合酶(如 Platinum™ Pfx DNA 聚合酶)生成的平末端 PCR 产物。pCR™Blunt II-TOPO™ 载体包含:

•位于 PCR 产物插入位点侧翼的 EcoRI 位点,可方便地切除插入片段
大肠杆菌中有卡那霉素和 Zeocin™ 抗性基因供您选择
• 用于体外 RNA 转录和测序的 SP6 启动子/引物位点
• 用于测序或 PCR 筛选的 M13 正向和反向引物位点

pCR™Blunt II-TOPO™ 克隆选择
pCR™-Blunt II-TOPO™ 可通过破坏致死性大肠杆菌基因 (ccdB) 直接选择重组体。载体含有与 LacZα 片段 C 端融合的 ccdB 基因。连接平末端 PCR 产物可破坏 LacZα-ccdB 基因融合的表达,从而在转化时仅允许阳性重组体生长。在平板接种时杀死含非重组载体的细胞。因此,无需进行蓝白斑筛选。

简化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO™ 克隆技术,无需使用含特异性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、载体制备或其他耗时长的 DNA 操作步骤。只需将 PCR 反应物直接添加至提供的拓扑异构酶带电载体中,孵育5分钟,并转化大肠杆菌感受态细胞。

高效克隆
携带所需插入片段的克隆高达 95%,您可以筛选更少的克隆体,节省时间和成本。该试剂盒中使用的 pCR™Blunt II-TOPO™ 载体含有致死性 ccdB 基因,用于高效选择由耐热校正聚合酶生成的平末端 PCR 重组产物。

克隆标准
在克隆方面,TOPO™ 克隆技术已作为一种可靠技术供成千上万的科学家使用达十余年。快速、简单易用且高效的 TOPO™ 克隆已在多种应用中应用于多种不同载体。

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning™ 试剂盒选项
根据您的需求,用于将平末端 PCR 产物直接插入质粒载体的 Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning 试剂盒可与具有不同优势的多种感受态细胞一起购买。

一般克隆:TOP10 细胞(货号号 K2800-20、K2800-40)
高效克隆:TOP10 Electrocomp™ 细胞(货号号 K2860-01、K2860-40)
一般克隆,噬菌体 T1 抗性:DH5α-T1R(货号 K2820-20、K2820-40)
快速增长:Mach1™-T1R 化学感受态大肠杆菌(货号 K2830-20)
自行提供:灵活性高且可节省成本(货号 450254)

我们还提供另一个版本的试剂盒,包括 PureLink™ 快速质粒小提试剂盒(货号 K2800-02),用于分离清洁、已完成测序的重组质粒。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

规格

耐抗生素细菌
卡那霉素 (KanR)、博莱霉素™ (ZeoR)
克隆方法
Blunt TOPO™
产品规格
试剂盒
适用于(应用)
平末端 PCR 产物的克隆
包括
线性化和拓扑异构酶 I 活化 pCR™Blunt II-TOPO™ 载体、盐溶液、dNTP、对照模板、M13 正向和反向引物、无菌水
产品线
TOPO™
产品类型
PCR 克隆试剂盒
促进剂
SP6
数量
10 次反应
有效期
妥善储存时,所有试剂均可稳定储存 6 个月。
载体
TOPO 克隆载体

内容与储存

盒 1:
• 线性化和拓扑异构酶 I 活化 pCR™Blunt II-TOPO™ 载体
• 盐溶液
• dNTP
• 对照模板
• M13 正向和反向引物
• 无菌水

在 -5 至 -30°C 下储存。
妥善储存时,所有试剂均可稳定储存 6 个月。

图表

文件和下载

证书

    常见问题解答 (FAQ)

    引用和文献

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