MAGnify™ 染色质免疫沉淀系统
MAGnify™ 染色质免疫沉淀系统
Applied Biosystems™

MAGnify™ 染色质免疫沉淀系统

MAGnify™ 染色质免疫沉淀系统为使用磁珠捕获技术富集染色质/蛋白复合物和 DNA 回收提供了一种简化、优化测定。分离的 DNA 可以通过基于 PCR了解更多信息
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MAGnify™ 染色质免疫沉淀系统为使用磁珠捕获技术富集染色质/蛋白复合物和 DNA 回收提供了一种简化、优化测定。分离的 DNA 可以通过基于 PCR 或 qPCR 的测定或大量平行 DNA 测序等方法进行下游分析。

ChIP
染色质免疫沉淀 (ChIP) 是研究某些蛋白质与基因组特异性区域相关的强大技术。认为这些序列特异性 DNA 结合蛋白在细胞过程(如 DNA 复制、重组、修复和分离)、染色体稳定性、细胞周期进展和表观遗传沉默中发挥作用。在标准的 ChIP 检测中,通过甲醛处理固定细胞、剪切染色质并通过高特异性抗体进行免疫沉淀。然后研究人员分析 DNA 以确定染色质相关蛋白在体内与染色质结合的基因组区域。该试剂盒使研究人员能够以低于传统 ChIP 工作流程所需的样品量开始测定,从而保留珍贵样品,并且方案可在一天内完成,而传统 ChIP 检测为 2–3 天。该试剂盒可与我们的 ChIP 验证抗体组配合使用,并与 MethylCode™ 和 NCode™产品互补,用于下游表观遗传学研究。

使用 MAGnify™ 系统
使用 MAGnify™ 系统时,您可使用甲醛处理细胞或组织,以在染色质复合物相邻分子间生成蛋白-蛋白和蛋白-DNA 交联。然后裂解细胞,从细胞核中释放染色质并通过超声处理剪切,将平均 DNA 片段大小降低至 200–500 bp 以通过实时荧光定量 PCR (qPCR) 进行分析,或降低至 100–300 bp 以通过大量平行 DNA 测序进行分析。然后免疫沉淀,并使用与 Dynabeads™ 蛋白 A/G 偶联的特异性 ChIP 验证抗体分离目标交联蛋白。通过热处理逆转甲醛交联,并纯化与该蛋白相关的 DNA。DNA 现已准备好用于下游分析,如终点 PCR 或定量 PCR (qPCR)、使用启动子平铺阵列的全基因组分析或下一代测序。在 PCR/qPCR 分析中,引物设计用于跨越所需的目标 DNA 序列,并且数据证明目标特异性蛋白在体内是否与该 DNA 区域相关。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
适用于(应用)染色质免疫沉淀
高通量能力兼容高通量应用
数量1 个试剂盒
样品类型细胞培养物、DNA(基因组)、活细胞
足够用于24 次反应
产品线MAGnify™
类型免疫沉淀系统
Unit SizeEach
内容与储存
模块 1(湿冰运输,在 4°C 下储存):
• 2 × 1 mL 甘氨酸 (1.25 M)
• 250 µL Dynabeads™蛋白 A/G(切勿冷冻)
•1.4 mL 反相交联缓冲液
• 500 µL DNA 纯化磁珠(切勿冷冻)
• 1.4 mL DNA 纯化缓冲液
• 200 µL 蛋白酶 K (20 mg/mL)

模块 2(湿冰运输,在 4°C 下储存):
• 10 mL IP 缓冲液 1
• 7.5 mL IP 缓冲液 2
• 8 mL DNA 洗涤缓冲液
• 7.2 mL DNA 洗脱缓冲液

模块 3(置于干冰上运输,在 -20°C 下储存):
• 100 µL 蛋白酶抑制剂 (200X)
• 15 µ L 小鼠 IgG (1 µg/µL)
• 15µ L 兔 IgG (1 µg/µL)

模块(置于干冰上运输,在 -20°C 下储存):
• 8 mL 稀释缓冲液
• 3.6 mL 裂解缓冲液

常见问题解答 (FAQ)

What is the recommended amount of starting material when working with the MAGnify Chromatin Immunoprecipitation System kit?

For each ChIP reaction, we recommend using 10,000-300,000 cells or 0.167-5 mg of tissue. To ensure consistency and decrease experimental variability, we recommend preparing a common chromatin batch suitable for multiple ChIP experiments. Note that following lysis, samples are at a concentration of 1 million cells/50 µL.

I am getting equivalent PCR signal from positive and negative control IP samples. Why is this?

There might be excess chromatin or antibody added to the IP, or insufficient amount of DNA template added into the PCR reaction. Also your PCR conditions might need optimizing. Try decreasing the number of amplification cycles in PCR. Finally, it is ideal to have duplicate or triplicate runs for each IP to identify any issues, like human or product errors.

I am not getting PCR signal in the experimental IP samples, while the results from positive and negative control IPs are as expected. What happened?

The most possible cause is the antibody does not function in IP. Not all antibodies used for western blotting will work well in ChIP. You need to verify the antibody is qualified for ChIP or IP applications. And try adding more antibody to the IP reaction and more DNA template to the PCR.

I am not getting any PCR signal with the positive control IP samples. Do you have some tips?

This is likely to be caused by insufficient chromatin amount in the IP reaction or insufficient antibody incubation time. We also recommend optimizing the crosslinking condition, and monitoring sonication of nuclei by microscope to ensure complete lysis.

I am doing chromatin analysis and am not getting PCR signal in the total input control samples. What should I do?

First make sure that the PCR condition is fully optimized and check the primer design. Then try increasing the amount of template DNA added to the PCR reaction. Finally, evaluate sonication of nuclei by microscope to ensure complete lysis.