Dynabeads™ Oligo(dT)25
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Dynabeads&trade; Oligo(dT)<sub>25</sub>
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Dynabeads™ Oligo(dT)25

Dynabeads™ Oligo(dT)25 mRNA 分离珠专门靶向和捕获几乎所有粗样品中的 mRNA 分子,当所需的含信息核酸为 mRNA 时,无需纯化总 RNA。由于了解更多信息
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Dynabeads™ Oligo(dT)25 mRNA 分离珠专门靶向和捕获几乎所有粗样品中的 mRNA 分子,当所需的含信息核酸为 mRNA 时,无需纯化总 RNA。由于 mRNA 仅占细胞总 RNA 的约 1–5%,因此总 RNA 分离并不是最有效的 mRNA 分离方法。其他设计用于纯化总 RNA 的技术可获得 ∼80% 的核糖体 RNA,并迫使 mRNA 在膜结合方面与核糖体 RNA、转运 RNA、微小 RNA、小核仁 RNA 和小胞浆 RNA 竞争。Dynabeads™ Oligo(dT)25 珠的优势:

•通过快速且温和的程序可获得完整 mRNA 纯品
• 极纯 mRNA 分离,cDNA 合成上游的极佳选择
• 极其灵敏的 mRNA 分离可通过超小量起始样品进行 cDNA 合成和 cDNA 文库构建(可通过单细胞实现 cDNA 文库构建)

珠的工作原理
寡核苷酸(dT)25-包被 Dynabeads™ 特异性靶向并捕获来自极其广泛的粗起始样品的 mRNA 转录组。核糖体 RNA、DNA、蛋白和小 RNA 分子(如转运 RNA、微小 RNA 和小核仁 RNA)不会与珠结合且会被丢弃。仅捕获多腺苷酸化 RNA 物质 (mRNA)。分离出的 mRNA 是纯品,无需进行核糖体 RNA 消减或提取后 DNase 处理。此无柱系统可确保极高转录组回收率:

•在移动磁珠上实现物理 mRNA 捕获
• 快速且温和的磁性处理流程
• 在高速离心期间不会损失 mRNA
• 在洗脱期间,mRNA 不会吸附在柱膜上

应用
mRNA 适用于所有下游分子应用,包括基因克隆、cDNA 合成、cDNA 文库构建、RT-PCR 定量 RT-PCR、RPA(核糖核酸酶保护试验)、消减杂交、引物延伸、SAGE、RACE 和其他。Dynabeads™ Oligo(dT)25 mRNA 分离珠是 cDNA 文库构建前的理想 mRNA 纯化方法。这些珠的使用确保了转录组的极高回收率和富集率。通过并入 mRNA 分离上游总 RNA 分离步骤的方法,这些珠可能会捕获更多的转录组。

Verastile 洗脱选项
可在低至 5 µL 的任何体积下进行洗脱。mRNA 洗脱是可选的,因为存在 Dynabeads™ 不会抑制下游程序中的酶反应。此外,可以直接在珠上进行 cDNA 合成以创建可重复使用的固相 cDNA 文库。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
适用于(应用)RNA 提取
形式悬浮磁珠
高通量能力兼容高通量应用
配基类型Oligo-dT
产品线DYNAL,Dynabeads
产品类型mRNA 分离微珠
数量2 mL
有效期自生产之日起 36 个月
运输条件室温
Unit SizeEach
内容与储存
2-8°C
2 mL 珠

常见问题解答 (FAQ)

我在使用Dynabeads磁珠分离mRNA时出现了DNA污染,为什么会出现这种情况?

DNA污染的原因有多种:

•DNA剪切不完全。
•在杂交步骤后,未完全去除样本裂解液。
•清洗不完全和/或洗涤缓冲液去除不完全。
•样本与磁珠的比例过高。

我在使用Dynabeads磁珠分离mRNA时出现了rRNA污染,该如何处理?

通过从洗脱液中再次提取mRNA,可以有效清除核糖体RNA。可重复利用初始分离时所使用的相同Dynabeads Oligo(dT)25磁珠。使用洗涤缓冲液B清洗磁珠2次。以4倍体积的裂解/结合缓冲液稀释洗脱mRNA,随后加入磁珠。在室温下孵育并混匀3-5分钟,随后继续执行直接mRNA分离实验方案。

分离的mRNA可以在Dynabeads Oligo(dT)25磁珠上保留多久?

我们推荐立即将Dynabeads磁珠-mRNA复合物或洗脱的mRNA用于RT-PCR的cDNA合成或其他下游应用。如果需要保存,我们推荐使用10 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)从磁珠上洗脱mRNA并冷冻保存(-80°C)。所有设备和样本都必须是无RNase的。

我的Dynabeads磁珠不能很好地吸附到磁力架上,对此你们有什么建议吗?

请查看以下可能原因:

•溶液太粘稠。
•蛋白质间相互作用导致磁珠聚集。

尝试以下建议:
•延长分离时间(将管子留在磁力架上2-5分钟)。
•向裂解液中加入DNase I(约0.01 mg/mL)。
•将结合和/或清洗缓冲液中的Tween20浓度增加至约0.05%。
•向结合和/或清洗缓冲液中加入最多至20 mM 的β-巯基乙醇。

在实时PCR中是否可以使用Dynabeads Oligo(dT)25磁珠?

Dynabeads磁珠可与TaqMan实时PCR反应和非毛细管实时PCR仪器兼容。但是,Dynabeads磁珠具有低水平的自发荧光,在一定程度上会增强PCR反应的荧光信号强度。这可通过在仪器中设置Dynabeads磁珠和水的背景而进行补偿。随后,在所有包含Dynabeads磁珠的实时PCR实验中,可从样本信号强度中减去背景信号强度。或者,在使用标准曲线法分析时,可在用于构建标准曲线的每个样本中均加入适量Dynabeads磁珠。

引用和文献 (1)

引用和文献
Abstract
20 beta-hydroxysteroid dehydrogenase and CYP19A1 are differentially expressed during maturation in Atlantic cod (Gadus morhua).
Authors:Mittelholzer C, Andersson E, Consten D, Hirai T, Nagahama Y, Norberg B,
Journal:J Mol Endocrinol
PubMed ID:17909270
In order to better quantify the molecular mechanisms regulating final oocyte maturation and spawning, complete coding sequences with partially or fully untranslated regions for the steroidogenic enzymes, cytochrome P450 aromatase and 20 beta-hydroxysteroid dehydrogenase, were cloned from ovaries of Atlantic cod (Gadus morhua). The nucleotide and amino acid sequences showed ... More