Dynabeads™ mRNA 纯化试剂盒(用于从总 RNA 制备液中纯化 mRNA)
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Dynabeads™ mRNA 纯化试剂盒(用于从总 RNA 制备液中纯化 mRNA)
Invitrogen™

Dynabeads™ mRNA 纯化试剂盒(用于从总 RNA 制备液中纯化 mRNA)

Dynabeads™ mRNA 纯化试剂盒通常在15分钟内快速分离 mRNA 转录组,提供完整的纯 mRNA。试剂盒设计用于从总 RNA 制备物中特异性靶向、捕获和纯化了解更多信息
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Dynabeads™ mRNA 纯化试剂盒通常在15分钟内快速分离 mRNA 转录组,提供完整的纯 mRNA。试剂盒设计用于从总 RNA 制备物中特异性靶向、捕获和纯化 mRNA 分子。使用 Dynabeads™ mRNA 纯化试剂盒的优势:

•通常在15分钟内获得纯 mRNA
• 高效回收和富集转录组
• 制备适用于几乎每个下游应用的 mRNA

快速纯 mRNA 分离
Dynabeads™ mRNA 纯化试剂盒含有磁珠,用于从任何总真核 RNA 制备液中分离 mRNA 转录组(参见图)。Dynabeads™ 磁珠尺寸均匀,在溶液中高度可移动(参见图)。这使得微珠捕获表面能够在 mRNA 捕获阶段与整个总 RNA 样品快速连续地相互作用。核糖体 RNA 和小 RNA 分子(转运 RNA、microRNA、小核仁 RNA 及小细胞质 RNA)不会与微珠结合,因此丢弃。仅捕获多腺苷酸化 RNA 物质(mRNA),从而获得更清洁、更灵敏的结果(参见图)。在约15分钟内即可分离出纯 mRNA,可随时用于下游应用。

直接可用富集程序
Dynabeads™ mRNA 纯化试剂盒采用稳健的亲和纯化原理,以富集多腺苷酸化 mRNA。首先用结合缓冲液平衡处理与寡核苷酸-(dT)25 偶联的超顺磁性 Dynabeads™,然后与纯化的总 RNA 混合。然后洗涤微珠以去除污染性 RNA 物质,然后用低至 5 µL 的 10 mM Tris-HCl 洗脱 mRNA。使用钕磁铁(单独购买)可促进整个过程,从而在缓冲液更换过程中快速、高效地固定磁珠。RNA 适用于所有下游分子应用,包括:

•基因克隆
• cDNA 合成、cDNA 文库构建
• RT-PCR、定量 RT-PCR
• RPA(核糖核酸酶保护测定)
• 消减杂交
• 斑点/狭线杂交
• 引物延伸
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
洗脱体积5 to 20 μL
最终产品类型mRNA
适用于(应用)逆转录酶 PCR (RT-PCR)
环保功能Beads may be reused for multiple extractions
纯化时间10 min.
数量2 mL
运输条件室温
原始材料量≤100 μL
产量2 μg mRNA per 200 μL of beads (Binding capacity)
分离技术磁珠
样品类型总 RNA
Unit SizeEach
内容与储存
2-8°C
2 mL 微珠 + 缓冲液

常见问题解答 (FAQ)

我在使用Dynabeads磁珠分离mRNA时出现了DNA污染,为什么会出现这种情况?

DNA污染的原因有多种:

•DNA剪切不完全。
•在杂交步骤后,未完全去除样本裂解液。
•清洗不完全和/或洗涤缓冲液去除不完全。
•样本与磁珠的比例过高。

我的Dynabeads磁珠不能很好地吸附到磁力架上,对此你们有什么建议吗?

请查看以下可能原因:

•溶液太粘稠。
•蛋白质间相互作用导致磁珠聚集。

尝试以下建议:
•延长分离时间(将管子留在磁力架上2-5分钟)。
•向裂解液中加入DNase I(约0.01 mg/mL)。
•将结合和/或清洗缓冲液中的Tween20浓度增加至约0.05%。
•向结合和/或清洗缓冲液中加入最多至20 mM 的β-巯基乙醇。

我想要分离较长的双链DNA片段,你们有什么产品可以推荐?

对于小于1 kb的生物素标记DNA,我们推荐使用Dynabeads M270链霉亲和素磁珠和MyOne C1磁珠。对于大于1kb的双链DNA分子,我们推荐Dynabeads KilobaseBINDER试剂盒。KilobaseBINDER试剂包括M-280链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠和一种含有专利的固定活化剂的结合液,可结合较长的生物素化DNA分子以进行分离。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/immobilisation-of-long-biotinylated-dna-fragments.html),查看关于长的生物素化DNA片段分离的更多信息。

我能否使用Dynabeads磁珠分离单链DNA模板?

可以,Dynabeads磁珠可用于分离单链DNA。链霉亲和素Dynabeads磁珠能够以生物素化的DNA片段为靶标,通过使双链DNA变性,从而去除非生物素化链。链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠不会抑制任何酶活性。因此,可以在固相上直接对磁珠结合的DNA进行下一步处理。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/preparing-single-stranded-dna-templates.html),查看关于单链DNA捕获的更多信息。

什么是磁化率?

磁化率能够衡量磁珠向磁力架迁移的速度,其大小取决于铁含量和氧化铁的特性。Dynabeads磁珠的磁化率是指质量磁化率,单位可以是cgs单位/g或m^3/kg(国际单位制)。对于亚铁磁性和铁磁性物质,质量磁化率取决于磁场强度(H),这些物质的磁化强度与H不是线性关系,而是随着场强增加而趋于饱和。因此, Dynabeads磁珠的质量磁化率是在固定条件下由标准操作程序而测定的。我们产品目录中给出的质量磁化率是国际单位制。磁化率由从高斯(cgs、emu)单位向国际单位的转换,是通过“高斯系数(emu/g或cgs/g)x 4π x 10^-3”而实现的。所得单位也被称为合理化质量磁化率,与(国际单位制)无量纲磁化率单位有所区别。通常,质量磁化率可用来衡量在非均匀磁场中影响物体的力(Fz)。测定Dynabeads磁珠的质量磁化率时,首先对样本称重,然后将样本放置于已知强度的磁场中。随后,再次称重得到样本重量(F1),并与关闭磁场时样本的重量(F0)进行对比。使用下述公式计算磁化率:K x 10^–3 = [(F1-F0) x m x 0.335 x 10^6],K表示质量为m的样本的质量磁化率。最后,将磁化率转换为国际单位制。

引用和文献 (5)

引用和文献
Abstract
Identification of a novel glucose transporter-like protein-GLUT-12.
Authors:Rogers S, Macheda ML, Docherty SE, Carty MD, Henderson MA, Soeller WC, Gibbs EM, James DE, Best JD
Journal:Am J Physiol Endocrinol Metab
PubMed ID:11832379
'Facilitative glucose transporters exhibit variable hexose affinity and tissue-specific expression. These characteristics contribute to specialized metabolic properties of cells. Here we describe the characterization of a novel glucose transporter-like molecule, GLUT-12. GLUT-12 was identified in MCF-7 breast cancer cells by homology to the insulin-regulatable glucose transporter GLUT-4. The GLUT-12 cDNA ... More
Transcriptome analysis by strand-specific sequencing of complementary DNA.
Authors:Parkhomchuk D, Borodina T, Amstislavskiy V, Banaru M, Hallen L, Krobitsch S, Lehrach H, Soldatov A
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:19620212
High-throughput complementary DNA sequencing (RNA-Seq) is a powerful tool for whole-transcriptome analysis, supplying information about a transcript's expression level and structure. However, it is difficult to determine the polarity of transcripts, and therefore identify which strand is transcribed. Here, we present a simple cDNA sequencing protocol that preserves information about ... More
Transcriptome sequencing to detect gene fusions in cancer.
Authors:Maher CA, Kumar-Sinha C, Cao X, Kalyana-Sundaram S, Han B, Jing X, Sam L, Barrette T, Palanisamy N, Chinnaiyan AM
Journal:Nature
PubMed ID:19136943
Recurrent gene fusions, typically associated with haematological malignancies and rare bone and soft-tissue tumours, have recently been described in common solid tumours. Here we use an integrative analysis of high-throughput long- and short-read transcriptome sequencing of cancer cells to discover novel gene fusions. As a proof of concept, we successfully ... More
Widespread occurrence of antisense transcription in the human genome.
Authors:Yelin R, Dahary D, Sorek R, Levanon EY, Goldstein O, Shoshan A, Diber A, Biton S, Tamir Y, Khosravi R, Nemzer S, Pinner E, Walach S, Bernstein J, Savitsky K, Rotman G
Journal:Nat Biotechnol
PubMed ID:12640466
An increasing number of eukaryotic genes are being found to have naturally occurring antisense transcripts. Here we study the extent of antisense transcription in the human genome by analyzing the public databases of expressed sequences using a set of computational tools designed to identify sense-antisense transcriptional units on opposite DNA ... More
Phylogenomic analyses of lophophorates (brachiopods, phoronids and bryozoans) confirm the Lophotrochozoa concept.
Authors:Helmkampf M, Bruchhaus I, Hausdorf B
Journal:Proc Biol Sci
PubMed ID:18495619
Based on embryological and morphological evidence, Lophophorata was long considered to be the sister or paraphyletic stem group of Deuterostomia. By contrast, molecular data have consistently indicated that the three lophophorate lineages, Ectoprocta, Brachiopoda and Phoronida, are more closely related to trochozoans (annelids, molluscs and related groups) than to deuterostomes. ... More