Dynabeads™ DNA DIRECT™ 通用试剂盒

高PCR背景可能是由过高的模板DNA、引物、Mg2+或dNTPs浓度所致。为解决这个问题，可以减少模板DNA、引物、酶和Mg2+的使用量，在PCR扩增前洗脱DNA，以及尝试使用热启动PCR。高背景也可能是由污染所致。应确保每次洗涤都完全去除上清液，避免残留。

我们推荐用重悬缓冲液，水或低离子强度的缓冲液65°C孵育5分钟以上来洗脱DNA。洗脱前确保复合物被充分重悬。重悬缓冲液可预热至65°C。孵育后将管子放在磁力架上30秒，把上清移至另一干净的管子中。你可以用部分洗脱的DNA进行琼脂糖凝胶电泳来评估洗脱效率。或者你也可用Dynabeads做模板进行PCR来评估残留在磁珠上的痕量DNA。加更多预热的洗脱缓冲液对提高洗脱效率会有帮助。

PCR可能被抑制剂抑制，或PCR循环数不足。对于抑制剂，应确保洗涤缓冲液恢复到室温后再使用，并增强加入缓冲液的力度。还应确保每一次清洗步骤中都完全去除上清液，或增加一次额外的清洗步骤。

请查看以下可能原因：

•溶液太粘稠。
•蛋白质间相互作用导致磁珠聚集。

尝试以下建议：
•延长分离时间（将管子留在磁力架上2-5分钟）。
•向裂解液中加入DNase I（约0.01 mg/mL）。
•将结合和/或清洗缓冲液中的Tween20浓度增加至约0.05%。
•向结合和/或清洗缓冲液中加入最多至20 mM 的β-巯基乙醇。

对于小于1 kb的生物素标记DNA，我们推荐使用Dynabeads M270链霉亲和素磁珠和MyOne C1磁珠。对于大于1kb的双链DNA分子，我们推荐Dynabeads KilobaseBINDER试剂盒。KilobaseBINDER试剂包括M-280链霉亲和素偶联的Dynabeads磁珠和一种含有专利的固定活化剂的结合液，可结合较长的生物素化DNA分子以进行分离。请点击以下链接(https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/napamisc/capture-of-biotinylated-targets/immobilisation-of-long-biotinylated-dna-fragments.html)，查看关于长的生物素化DNA片段分离的更多信息。