T7 基因 6 核酸外切酶

通过释放寡核苷酸和单核苷酸，T7 Gene 6 核酸外切酶从 5'-磷酰基核苷酸或 5'-羟基核苷酸中以 5'→3' 方向将双螺旋 DNA 非持续性水解，直至约 50% 的 DNA 可溶于酸。它还能从 5'→3' 方向在5'-端的双链 DNA 和 RNA:DNA 杂交体中 RNA 裂隙和缺口处降解核苷酸。

T7 基因 6 核酸外切酶与 λ 核酸外切酶相似，原因是核酸外切酶能够催化 5'端双螺旋 DNA 的逐级水解并释放 5'单核苷酸。然而，与 λ 核酸外切酶不同的是，该酶的持续合成能力低，会去除 5'-羟基末端和 5'-磷酰基末端。

其还能在 5'→3' 方向上降解 RNA:DNA 杂交体中的 RNA 和 DNA，但不能降解双链 或单链 RNA。

该酶已用于生成针对测序或 SNP 分析的单链 DNA 模板。

特性
分子量：32 kDa
最适 pH 值：7.5
最适温度：37°C
失活：75°C 下持续 10 min 或加入 2 μL 0.5 M EDTA（对于 50 μL 的反应体积）。

失活
在 75 °C 下加热 10 min 或加入 2 μL 0.5 M EDTA（对于 50 μL 的反应体积）。

纯度：
经 SDS-PAGE 测定，纯度高于 95%。已检测污染性核酸内切酶和核糖核酸酶。

储存缓冲液
50 mM KPO₄（pH 值 6.5）、1 mM EDTA、1 mM DTT、50% 甘油。

测定条件
反应混合物 (50 μL) 包含 50 mM Tris-HCI（pH 值 8.1）、5 mM MgCl₂、20 mM KCI、5 mM 2-巯基乙醇、双链 DNA 和酶。孵育在 37°C 下进行，持续 15 min。

单位定义：
一个单位是指催化变性 DNA 释放 1 nmoL 酸溶性核甘酸的酶量（标准测定条件、15 min 内、37°C 下）。

浓度
50 个单位/μL

来源
大肠杆菌 菌株（包含 T7 Gene 6 核酸外切酶的一个高产克隆）

功能测试
将 0.5 pmol λ DNA 转化为单链半分子（使用 75 个单位的酶、30 min 内、37°C 下）。经琼脂糖凝胶电泳验证。

应用：
  1.从 5'端
  2对双链 DNA 的受控逐级酶切。生成用于测序或 SNP 分析的 ssDNA 模板