Pierce S-亚硝基化 Western 印迹试剂盒提供了细胞裂解/反应缓冲液、巯基反应性封闭剂、还原剂、标记剂和抗 TMT 抗体,可用于标记40份样品(每份 100 μg)。与传统 S-亚硝基化转换测定一样,未修饰的半胱氨酸被巯基反应性化合物所封闭。在 HENS 缓冲液中用抗坏血酸盐选择性还原 S 亚硝基化半胱氨酸,以用 iodoTMTzero 试剂进行标记,该试剂与进行 S 亚硝基化的半胱氨酸硫醇不可逆地结合。使用抗 TMT 抗体方便进行 TMT 试剂修饰蛋白的检测。
S-亚硝基化是一种转录后修饰,可调控多种过程,包括细胞增殖、细胞凋亡、平滑肌松弛、神经递质释放和分化。在 S-亚硝基化过程中,一氧化氮自由基与半胱氨酸硫醇反应,产生可以改变蛋白质活性的 S-NO 加合物。
Pierce S-亚硝基化 Western 印迹试剂盒
Pierce S-亚硝基化 Western 印迹试剂盒提供了用于传统 S-亚硝基化转换测定改良版的必要试剂(包括半胱氨酸封闭试剂、还原剂、反应缓冲液、iodoTMT 标记试剂以及抗 TMT 抗体)。使用非生物 iodoTMT 试剂而不是 HPDP-生物素完成标记,因此降低了 Western 印迹检测期间背景信号。除了通过 Western 印迹检测 S-亚硝基化蛋白外,固定化抗 TMT 树脂可用于选择性富集用 iodoTMT 试剂标记的 S-亚硝基化蛋白/肽。该工作流程可使用质谱法进行 S-亚硝基化位点图谱分析和多通路定量分析。
Pierce S-亚硝基化 Western 印迹试剂盒的特点包括:
• 特异性—优化的标记反应用 iodoTMT 试剂转换 S-亚硝基半胱氨酸翻译后修饰,以便使用抗 TMT 抗体进行 Western 印迹检测
• 更好的信噪比—使用非生物 iodoTMT 试剂而不是 HPDP-生物素进行标记,使得 Western 印迹检测期间背景较低
• 工作流程兼容—标记方法与替代分析方法(包括通过抗 TMT 树脂进行富集和通过质谱进行多通路定量)兼容
• 便利—一个试剂盒含有所有需要的试剂
HENS 缓冲液
HENS 缓冲液包括 100 mM HEPES (pH 7.8)、1 mM EDTA、0.1 mM 新亚铜试剂和 1% SDS。它是一种细胞裂解缓冲液,旨在与 Pierce S-亚硝基化 Western 印迹试剂盒配合使用,后者可在一个完整且易用的试剂盒中对 S-亚硝基半胱氨酸翻译后修饰的蛋白质进行灵敏检测。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。