PichiaPink™ 分泌信号集
Product Image
Invitrogen™

PichiaPink™ 分泌信号集

PichiaPink™ 分泌信号集是一组编码分泌信号序列的 8 DNA 片段。PichiaPink™ 分泌信号集设计用于轻松连接于基因前方。PichiaPink™ 分泌信号集设计用于与 pPINK-HC了解更多信息
Have Questions?
货号数量
A111551 个试剂盒
货号 A11155
价格(CNY)
35,287.89
飞享价
Ends: 31-Dec-2025
42,139.00
共减 6,851.11 (16%)
Each
添加至购物车
数量:
1 个试剂盒
价格(CNY)
35,287.89
飞享价
Ends: 31-Dec-2025
42,139.00
共减 6,851.11 (16%)
Each
添加至购物车
PichiaPink™ 分泌信号集是一组编码分泌信号序列的 8 DNA 片段。PichiaPink™ 分泌信号集设计用于轻松连接于基因前方。PichiaPink™ 分泌信号集设计用于与 pPINK-HC 和 pPINK-LC 载体配合使用。

优化您的表达蛋白的分泌
通过在您的基因中添加 8 个分泌信号序列中的一个,您可以将您的蛋白分泌到培养基中,以便于收获和纯化。毕赤酵母分泌的天然蛋白很少,因此培养基中的大部分蛋白都是您所需的蛋白。

每个 DNA 序列编码不同的分泌信号。您可以检测每个分泌物信号序列,以找到对您的蛋白较有效的信号序列。

PichiaPink™ 分泌信号集具有 8 种不同分泌信号,包括:
•   酿酒酵母α-交配因子前序列
•   黑曲霉α-淀粉酶信号序列
•   泡盛曲霉葡糖淀粉酶信号序列
•   智人血清白蛋白信号序列
•   马克斯克鲁维酵母 菊粉酶信号序列
•   酿酒酵母转化酶信号序列
•   酿酒酵母杀伤蛋白信号序列
•   原鸡溶菌酶信号序列

向您的蛋白中轻松添加分泌信号
PichiaPink™ 分泌信号集中的 DNA 片段设计用于在使用 pPINK-HC 或 pPINK-LC 载体时轻松插入您基因的前方。您可以尝试不同的分泌信号序列,以确定哪一种可使您的蛋白实现较佳分泌。

每个信号序列包括来自毕赤酵母AOX1 基因的 Kozak 序列,以确保蛋白的有效翻译。

分泌信号序列以 40 pmol 等份试液中的磷酸化双链低聚物形式出现。使用前,在 40 µl TE 缓冲液中重悬低聚物。

为什么选择 PichiaPink™ 酵母菌表达系统?
PichiaPink™ 酵母菌表达系统以酵母菌毕赤酵母为基础。毕赤酵母的优点包括快速生长、明确的遗传背景、简单的培养基配方和易于处理。30 多年来,毕赤酵母已经被全球实验室用于生产来自多个物种(包括人类)的数百种不同蛋白(参考文献 1、2)。PichiaPink™ 酵母菌表达系统使您能够以便利且具成本效益的方式实现从小规模到大规模的蛋白质生产。

有关获取 PichiaPink™ 酵母菌表达系统商业用途许可证的信息,请访问outlicensing@lifetech.com

仅供研究使用。不适用于任何动物或人的治疗或诊断。

相关链接
请参阅了解更多有关 PichiaPink™ 酵母表达系统的信息
了解更多有关其他蛋白表达系统的信息

参考文献

1.Cereghino JL, Cregg JM.Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris.FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66.[PubMed]
2.Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM.Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.Curr Opin Biotechnol.2002 Aug;13(4):329-32.[PubMed]
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细菌或酵母菌株PichiaPink™
克隆方法限制性内切酶/MCS
描述克隆至表达载体中
表达机制基于细胞的表达
适用于(应用)蛋白表达
产品类型分泌物信号集
数量1 个试剂盒
运输条件室温
促进剂AOX1
种属毕赤酵母
矢量pPINK-LC、pPINK-HC
Unit SizeEach
内容与储存
PichiaPink™ 分泌信号集由 8 个信号序列组成,其为 DNA 双链体:
•酿酒酵母 α 交配因子预序列
• 黑曲霉 α 淀粉酶
• 泡盛曲霉葡糖淀粉酶信号
•智人血清白蛋白信号
• K. maxianus 菊粉酶预序列
• 酿酒酵母杀灭蛋白质序列
• 酿酒酵母转化酶信号序列
• 原鸡溶菌酶信号序列

数量:40 皮摩尔
在 -20°C 下储存

常见问题解答 (FAQ)

当使用pPIC6/pPIC6α载体在X-33酵母株中筛选杀稻瘟菌素抗性转化株时,为什么在含300 μg/ml杀稻瘟菌素的YPD培养皿中得到的菌落有大有小?

通常,大菌落代表含pPIC6/pPIC6α整合体的转化株,而小菌落代表含pPIC6/pPIC6α非整合体的转化株。这些非整合体转化株已经转导了pPIC6/pPIC6α质粒,因此,在起始筛选过程中表现出低水平的杀稻瘟菌素抗性。在后续筛选中,这些非整合体转化株不会保持杀稻瘟菌素抗性。

当您为表达实验选择杀稻瘟菌素抗性转化株时,我们建议您从起始转化培养皿中挑选杀稻瘟菌素抗性菌落,然后在第二个含有适当浓度杀稻瘟菌素的YPD培养皿中划线。应选择可保持杀稻瘟菌素抗性的转化株用于下一步研究。

我的转化失败了。你们有何建议?

•应确保收集的是处于对数生长期的细胞(通常OD <1.0)。
•如果使用电穿孔法,应查看电穿孔仪使用手册中的推荐条件。可根据需要,改变电穿孔参数。
•使用更多的DNA。
•使用新鲜配制的感受态细胞。
•如果使用LiCl转化法,可尝试煮沸载体DNA。

我成功制备了两次Pichia的原生质球,之后就制备不成功了。培养物的OD值根本不降低。

应考虑以下几点:

1.如果所用细胞的OD值过高,则它们不能形成原生质球。不要使细胞过度生长。
2.不要使用衰老的细胞,应确保细胞处于对数生长期。
3.使用前,将酵母裂解酶混合均匀。酵母裂解酶更大程度上是一种悬液,而非溶液。
4.每次都使用新鲜配制的PEG溶液,并检查pH。

使用组成型表达载体(如pGAPZ)进行发酵,是否有推荐的实验方案?

pGAP克隆可使用以下高细胞密度实验方案。加入碳料,直至达到所需的细胞密度(细胞湿重(WCW)为300-400 克/升)。如果发酵罐中的蛋白状态良好,可增加至300–400 克/升 WCW,与甲醇诱导型克隆相似。在发酵后48小时内,可达到该密度。我们已经使用这些方案,使组成型表达载体在甘油中进行发酵,并得到良好的结果。您可能需要对发酵基础盐培养基做以下改进:

1) 在分批发酵培养基中,用2%葡聚糖代替4%甘油。
2) 在补料生长培养基中,用40%葡聚糖代替50%甘油。
3) 以12 毫升/升/小时的速度补加40%葡聚糖(Jim Cregg已经发表使用多种碳源作为底物进行表达的数据;葡聚糖带来最高表达水平)。
4) 可在培养基中加入酵母提取物和蛋白胨,维持蛋白稳定性。

警告:如果您在使用His-酵母株,使用pGAPZ转化后,酵母株依然是His-标记的。使用基本培养基发酵时,需要在发酵罐中加入组氨酸。

用于制备Pichia发酵培养基的甲醇和氢氧化铵溶液能否进行高压灭菌?

不能,您不能对甲醇进行高压灭菌。有两种方法可解决该问题,一定程度上取决于生物反应器的大小和使用体积。您可将甲醇稀释到工作浓度,并用适用于乙醇的过滤器进行过滤除菌,或者您可以假设甲醇是无菌的(本应该是无菌的)并将其直接稀释到无菌水中。氢氧化铵溶液也不可以进行高压灭菌。您可以假设30%储液是无菌的(没有生物能在该溶液中存活),并使用无菌水将其稀释至工作浓度。