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含有足以制成 4 种基本培养基的袋:
2 袋 PAD 琼脂、2 袋 YPDS、2 袋 YPD、2 袋 YPD 琼脂、1 袋葡萄糖
室温保存
这可能是因为接种物较少。我们建议使用起始培养物,这比使用菌落更精确。您可使用倍增时间来计算起始OD。在YPD中,倍增时间约为1.5小时。在MGY中,倍增时间约为3小时。
通常,大菌落代表含pPIC6/pPIC6α整合体的转化株,而小菌落代表含pPIC6/pPIC6α非整合体的转化株。这些非整合体转化株已经转导了pPIC6/pPIC6α质粒,因此,在起始筛选过程中表现出低水平的杀稻瘟菌素抗性。在后续筛选中,这些非整合体转化株不会保持杀稻瘟菌素抗性。 当您为表达实验选择杀稻瘟菌素抗性转化株时,我们建议您从起始转化培养皿中挑选杀稻瘟菌素抗性菌落,然后在第二个含有适当浓度杀稻瘟菌素的YPD培养皿中划线。应选择可保持杀稻瘟菌素抗性的转化株用于下一步研究。
•应确保收集的是处于对数生长期的细胞(通常OD <1.0)。 •如果使用电穿孔法,应查看电穿孔仪使用手册中的推荐条件。可根据需要,改变电穿孔参数。 •使用更多的DNA。 •使用新鲜配制的感受态细胞。 •如果使用LiCl转化法,可尝试煮沸载体DNA。
应考虑以下几点: 1.如果所用细胞的OD值过高,则它们不能形成原生质球。不要使细胞过度生长。 2.不要使用衰老的细胞,应确保细胞处于对数生长期。 3.使用前,将酵母裂解酶混合均匀。酵母裂解酶更大程度上是一种悬液,而非溶液。 4.每次都使用新鲜配制的PEG溶液,并检查pH。
细菌用-胰蛋白胨和细菌用-蛋白胨是两种不同的特定类型蛋白胨。细菌用胰蛋白胨是一种稍差的氮源,更多的氮是由酪氨酸和色氨酸提供的。将它们作为Pichia生长培养基的组分进行比较时,生长曲线会稍有不同,但差异很小。在以酵母氮源基础作为主要氮源的Pichia培养基配方中,如BMGY和BMMY,差异非常小或无差异。