CloneMiner™ II cDNA 文库构建试剂盒

CloneMiner™ II cDNA 文库构建试剂盒是第二代 CloneMiner™ 试剂盒，可快速构建高代表性 cDNA 文库，无需限制性内切酶克隆。这种创新性文库构建技术将 SuperScript™ III 逆转录酶与 Gateway™ 克隆技术相结合，从而发现获得先前不可获得的全长克隆。该试剂盒还避免了使用耗时、低效的连接反应，使得文库构建更快速并提供更好地表示。

CloneMiner™ II cDNA 文库构建试剂盒可确保：
•较高的一级滴度
• 较大的平均插入片段大小
• 最高全长基因百分比
• cDNA 高效克隆到多个目的载体无需限制酶酶切和连接

CloneMiner™ II 试剂盒如何工作：

•全长 cDNA 得率较高：CloneMiner™ II 试剂盒包含 SuperScript™ III，可获得较高 cDNA 得率。SuperScript™ III 逆转录酶 (RT)（一种具有专利技术的 SuperScript™ II RT 突变）在 50°C 下具有活性，半衰期为 220 分钟。其还具有可减少 RNase H 活性的点突变，从而在第一链合成过程中降低 RNA 降解并提高全长基因的百分比。

•Gateway™ 克隆技术避免了限制性内切酶克隆：文库构建由 Gateway™ 技术介导，该技术是一种无需使用限制性内切酶和连接酶进行克隆的位点特异性重组系统。每一个 cDNA 插入片段的两侧为特异性 att 重组位点（在 cDNA 合成步骤中添加），该位点与 Gateway™ 供体载体中存在的互补 att 位点相同以创建入门克隆。随后，使用 Gateway™ 表达载体重组入门克隆以创建表达克隆，有效地取代了限制性内切酶和连接酶的使用。得到的克隆保留了原始方向和读取框架，从而能够对全长基因和整个文库进行功能分析。

该试剂盒与原始 CloneMiner™ 试剂盒有何不同？
•新的试剂盒包含简化的方案。
•为了确保获得较高 cDNA 得率，SuperScript™ II 逆转录酶 (RT) 被 SuperScript™ III 逆转录酶取代。
•为使反应构建具有更少的移液步骤，Gateway™ BP Clonase™ 酶混合物已被 Gateway™ BP Clonase™ II 酶混合物取代，后者在单一混合物中包含了酶和缓冲液。