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人体ES细胞一般可通过以下方法进行鉴定:经典型的形态(它们以致密的细胞团形式生长 生长为紧密聚集的小型细胞团,细胞小并具有高核质比);表面标志物的表达;干细胞特异性基因表达的RT-PCR检测(如Oct3/4,Sox2和Nanog);碱性磷酸酶染色和端粒酶活性检测。最为常用的人ES细胞特异性表面标志物包括发育阶段特异性的胚胎抗原SSEA-3和SSEA-4。其它的ES细胞特异性的其它表面抗原还包括TRA-1-60和TRA-1-81。(Science 282:1145 (1998))。
人胚胎干细胞源自人类囊胚内细胞团, 是通过使用兔抗血清检测BeWO细胞(人滋养层细胞系)抗血清的通过免疫外科法手段来进行分离的(Science 282:1145 (1998))。
胚胎干(ES)细胞是源自早期哺乳动物胚胎的细胞,能够在体外进行无限的未分化增殖,同时保留分化为各类成体组织(包括生殖细胞)的潜能。ES细胞的多能性通常在体外通过以下方法来证明:将ES细胞诱导分化为类拟胚体,并以谱系特异性的标志物检测三个体胚层(内胚层,中胚层和外胚层)中分化细胞的谱系特异性标志物分化情况,或将这些细胞注射到免疫缺陷型小鼠中,以检测畸胎瘤中产生的细胞类型。
通常情况下,加入血清后的培养基可使用三个星期。尽管没有正式的研究支持数据,这是我们研究人员的经验。
我们会在常温下运输那些需要在冰箱中长期存放的培养基。我们对代表性的培养基配方进行了研究,结果表明这些培养基在室温下放置一周不会有问题。