GeneArt™ 定点突变系统
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Invitrogen™

GeneArt™ 定点突变系统

GeneArt™ 定点突变系统可提供较先进、简单、方便且高效的方法,在不到三小时内在体外靶标构建体上生成突变。该系统取代常用 GeneTailor™ 定点突变系统,并且完全重新设计为处于市场上当前可用的商业定点突变产品的前沿。该产品可将我们的突变技术提升到一个新的水平。备注:PCR 酶不包括在系统中,须单独购买了解更多信息
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A1328216 Reactions
货号 A13282
价格(CNY)
6,439.00
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8,510.00
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GeneArt™ 定点突变系统可提供较先进、简单、方便且高效的方法,在不到三小时内在体外靶标构建体上生成突变。该系统取代常用 GeneTailor™ 定点突变系统,并且完全重新设计为处于市场上当前可用的商业定点突变产品的前沿。该产品可将我们的突变技术提升到一个新的水平。备注:PCR 酶不包括在系统中,须单独购买。针对该试剂盒推荐的酶是 AccuPrime™ Pfx DNA 聚合酶。

有效– 可在长达 14 Kb 的质粒中取代、删除或插入多达 12 个核苷酸
高效– 首次使用即可获得您的所需突变体;使用 3 Kb 质粒可获得超过 90% 的正确突变体
快速– 使用简单、较少的处理方案在不到 3 小时内即可获得您的突变质粒 DNA
通用型– 可使用多种大小的质粒和从任意来源分离的 DNA,无需专用载体、宿主菌株或限制性位点

简单创建所需突变体
使用 GeneArt™ 定点突变系统创建突变体依赖于 DNA 甲基化酶、高保真度 DNA 聚合酶、重组酶和大肠杆菌天然 McrBC 核酸内切酶的固有特性。只需将您需要的一个突变或多个突变(多达 12 个核苷酸)掺入引物中,然后进行 PCR、重组和转化,此后您就能获得仅具有您所需突变的载体,效率高达 90%。您向其中添加突变的模板载体可从任何来源中分离出来,大小高达 14 Kb。要创建完整的构建体或要连接大量不相关 DNA,请参见我们的 GeneArt™ 无缝克隆和组装试剂盒(货号 A13288)或 GeneArt™ 高阶遗传组装系统(货号 A13286)。

优化突变方案
GeneArt™ 定点突变系统已在效率和简单性方面进行了优化。DNA 甲基化和扩增步骤整合到单次反应中,无需体外 DpnI 酶切步骤。甲基化和扩增后,扩增 PCR 产物的 10 分钟体外重组反应使菌落输出量增加 3 至 10 倍,从而获得更高突变效率。将突变 DNA 最终转化至 DH5α™大肠杆菌细胞中,可对任何甲基化亲本 DNA 进行酶切,仅留下完整的未甲基化突变反应产物。无需纯化步骤或额外的酶切。可于次日选择单个菌落以验证突变。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细菌或酵母菌株DH5α
细胞类型化学感受态大肠杆菌
效率90%
适用于(应用)无缝克隆与基因组装
诱变能力单位点突变
诱变处理区域长度(最大值)12 个核苷酸
突变类型缺失、插入、置换
质粒多达 14 kb 的质粒
产品线GeneArt™
产品类型定点突变系统
数量16 Reactions
Unit SizeEach
内容与储存
每个 GeneArt™ 定点突变系统包括足够进行 16 次反应的试剂和一份对照品:DNA 甲基化酶、S-腺苷甲硫氨酸、酶混合物和缓冲液、增强剂、0.5 M EDTA、无菌水、pUC19WHITE 突变对照品以及 One Shot™ MAX Efficiency DH5α™-T1R 化学感受态细胞。

PCR 酶不包括在系统中,必须单独购买。针对该试剂盒推荐的酶是 AccuPrime™ Pfx DNA 聚合酶。

将 -80°C 模块和大肠杆菌感受态细胞储存在 -80°C 下。

将所有其他组分储存在 -20°C 下。

妥善储存时,可保证稳定储存 6 个月。

常见问题解答 (FAQ)

可以单独购买GeneArt定点突变试剂盒内的DNA甲基化酶吗?

GeneArt定点突变试剂盒内的DNA甲基化酶不作为单独产品出售。

怎样使用两个互有重叠部分的引物产生两个末端均带有同源序列的最终产物?

当在环形模板上进行第一个PCR循环时,聚合酶将生成两个能够退火并在下一个循环能进行引物延伸的线性产物(参见下图)。在两个末端引入了突变的PCR产物将在后续循环中累积。在PCR之后,PCR产物经过重组反应进行环化,从而进一步提高了突变效率。

如何设计用于GeneArt定点突变系统的突变引物?突变位点可以有多大以及突变应设计在引物的什么位置?引物需要多长?

引物长度在30-45 nt左右,突变位置应位于引物中央。根据突变的大小,突变两侧应至少有15-20 nt的侧翼序列,引物的长度不超过45 nt。我们建议使用我们的在线GeneArt引物设计工具。

GeneArt定点突变试剂盒内的200X SAM浓度是多少?

浓度是32 mM。

GeneArt定点突变试剂盒和之前已经停产的GeneTailor试剂盒有什么区别?

•GeneArt试剂盒合并了甲基化和DNA扩增步骤,实验方案节省了1小时
•GeneArt 无缝克隆和组装试剂盒内的酶混合物是实验方案的一部分,可以大大提高了克隆的效率而无需进行很多轮PCR扩增(这是另一个节省时间的步骤)
•新试剂盒还包含一个应用于PCR步骤的增强子,可以提升突变效率,适用的质粒大小范围很广。