进行限制性内切酶克隆除了连接酶以外还需要什么酶?
对载体进行去磷酸化以降低背景时可以使用:
热失活的碱性磷酸酶,或
牛小肠碱性磷酸酶(提供1 unit/μL或20 units/μL)规格)
如果需要获得磷酸化的DNA平末端(“补平”末端),您可以使用:
可以用DNA End Repair Mix或T4 DNA 聚合酶或E. coli DNA聚合酶Klenow片段(大片段)来产生平末端,因为它们有5’ →3’DNA聚合酶活性(补齐5’突出端)和3’→5’外切酶活性(切除3’突出端)。
热失活的碱性磷酸酶,或
牛小肠碱性磷酸酶(提供1 unit/μL或20 units/μL)规格)
如果需要获得磷酸化的DNA平末端(“补平”末端),您可以使用:
可以用DNA End Repair Mix或T4 DNA 聚合酶或E. coli DNA聚合酶Klenow片段(大片段)来产生平末端,因为它们有5’ →3’DNA聚合酶活性(补齐5’突出端)和3’→5’外切酶活性(切除3’突出端)。