GeneArt™ 定点突变 PLUS 系统
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Invitrogen™

GeneArt™ 定点突变 PLUS 系统

GeneArt™ 定点突变 PLUS 系统可将我们的突变技术提升到一个新的水平,与竞争产品相比,该技术具有以更高的效率在更短的时间内在更大质粒中进行单位点或多位点突变的能力。•有效—可在长达 14 kb 的 DNA 质粒中的了解更多信息
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GeneArt™ 定点突变 PLUS 系统可将我们的突变技术提升到一个新的水平,与竞争产品相比,该技术具有以更高的效率在更短的时间内在更大质粒中进行单位点或多位点突变的能力。

有效—可在长达 14 kb 的 DNA 质粒中的 1、2 或 3 个单独位点中取代、删除或插入多达 3 个核苷酸
灵活—可进行简并核苷酸的多位点突变和含简并核苷酸的长达 25 个核苷酸或 12 个核苷酸的单位点突变
高效—首次使用即可获得您的所需突变体;10 Kb 质粒中存在超过 90% 的正确突变体
快速—使用简单、极少的处理方案通常在不到 3 小时内即可获得您的突变质粒 DNA
通用型—可使用多种大小的质粒和从任意来源分离的 DNA,无需专用载体、宿主菌株或限制性位点

优化突变方案
进一步优化了 GeneArt™ 定点突变系统的效率和多位点能力,从而获得了“PLUS”试剂盒。与第一代 GeneArt™ 定点突变系统一样,DNA 甲基化和扩增步骤整合到单次反应中,无需体外 DpnI 酶切步骤。甲基化和扩增后,扩增 PCR 产物的 15 分钟体外重组反应使菌落输出量增加 3 至 10 倍,从而获得更高突变效率。将突变 DNA 最终转化至 DH5α™ 大肠杆菌细胞中,可对任何甲基化亲本 DNA 进行酶切,仅留下完整的未甲基化突变反应产物。无需纯化步骤或额外的酶切。可于次日选择单个菌落以验证突变。

简单创建所需突变体
使用 GeneArt™ 定点突变 PLUS 系统创建依赖于 DNA 甲基化酶、高保真度 DNA 聚合酶、重组酶以及大肠杆菌的天然 McrBC 核酸内切酶的固有特性。使用我们的用于无缝组装和突变的 GeneArt™ 设计工具即可将您的所需突变掺入到引物中(参见下文“电脑模拟设计支持”)。将载体和突变引物相结合,在 PCR、重组和转化后您将获得仅具有所需突变的载体,其效率超过 90%。

电脑模拟设计支持
GeneArt™ 定点突变中的一个关键步骤是具有适当同源性和间距的引物的正确设计,以帮助确保质粒成功诱变。为简化和加速设计流程,我们提供了一种免费在线工具(用于无缝或高阶组装和突变的 GeneArt™ 设计工具)来帮助您通过电脑模拟设计实验。该工具允许您查看质粒序列,设计用于导入所需突变的 DNA 寡核苷酸,为您的突变基因提供更新的氨基酸序列,显示了新构建体的图形表示,并能下载与 Vector NTI™ 软件兼容的 GenBank 格式的注释序列。

仅供研究使用。不得用于人或动物的治疗或诊断用途。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
细菌或酵母菌株DH5α
细胞类型化学感受态大肠杆菌
效率90 %
适用于(应用)无缝克隆与基因组装
诱变能力在多个位点进行突变
诱变处理区域长度(最大值)3 个核苷酸(多位点)、25 个核苷酸(单位点)
突变类型缺失、插入、置换
质粒多达 14 kb 的质粒
产品类型定点突变 PLUS 系统
数量10 Reactions
Unit SizeEach
内容与储存
1瓶 GeneArt 酶 (2X)
1 瓶 DNA 甲基化酶
EDTA、200X SAM、PCR 增强剂、PCR 水、对照引物和载体各 1 瓶

常见问题解答 (FAQ)

可以单独购买GeneArt定点突变试剂盒内的DNA甲基化酶吗?

GeneArt定点突变试剂盒内的DNA甲基化酶不作为单独产品出售。

怎样使用两个互有重叠部分的引物产生两个末端均带有同源序列的最终产物?

当在环形模板上进行第一个PCR循环时,聚合酶将生成两个能够退火并在下一个循环能进行引物延伸的线性产物(参见下图)。在两个末端引入了突变的PCR产物将在后续循环中累积。在PCR之后,PCR产物经过重组反应进行环化,从而进一步提高了突变效率。

GeneArt定点突变PLUS试剂盒和GeneArt定点突变系统有什么区别?

两种试剂盒几乎相同,但是PLUS试剂盒包含一个改进的2X GeneArt酶混合物,并提供了针对多点突变优化的protocol (最多3个位点,所用质粒最大14 kb)。PLUS试剂盒还可以用于在小于14 kb的质粒内进行最多25个核苷酸的单点突变,而原来的试剂盒只能用于最多12个核苷酸的替换/删除/插入。有一个网络工具可以用于引物设计,该工具也适用于原来的试剂盒。

我想通过GeneArt定制服务对我自己的质粒进行定点突变。这可以吗?

可以。将“single variant”作为新过程添加,然后选择“upstream service”(“gene synthesis”,“already at Geneart”,或者“I will provide this master gene”)。如果您提供的是您自己的基因,那么您将需要填写载体+插入片段的全部序列。如果它只是一个质粒,您将需要将突变区域填写为“insert”,而将质粒剩余部分作为“vector”。“插入片段”最长可以是4 kb。

你们提供定点突变(site-directed mutagenesis)试剂盒吗?

是的,我们提供三种定点突变试剂盒:GeneArt定点突变系统和GeneArt定点突变PLUS试剂盒、Phusion定点突变试剂盒以及GeneArt定制服务。< br / > < br / > 这些试剂盒几乎是相同的,但是PLUS试剂盒包含了改良的2倍GeneArt酶混合物,以及针对多位点突变优化的方案(质粒中最多有3个位点,最长可达14kb)。PLUS试剂盒还可用于多达25个核苷酸的单位点突变,而原始试剂盒可在长达14kb的质粒中进行的单碱基替换/缺失/插入最多是12个核苷酸。另外还引入了一个web工具用于引物设计,但它也可以用于原来的试剂盒。Phusion定点突变试剂盒是一种多功能、高效的工具,可以在任何类型的质粒DNA中引入点突变、插入或缺失。使用这个试剂盒,整个质粒被磷酸化引物扩增,引物引入所需的变化。包含目的突变的线性PCR扩增产物,在T4 DNA连接酶作用下进行连接反应5分钟被环化。得到的质粒可以转化任何大肠杆菌感受态细胞中。