GeneArt™ 无缝克隆和组装酶混合物
GeneArt™ 无缝克隆和组装酶混合物
Invitrogen™

GeneArt™ 无缝克隆和组装酶混合物

GeneArt™ 无缝克隆和组装酶混合物可在单次 30 分钟室温反应中将由任一序列组成的 1 至 4 个 PCR 片段同时定向克隆至任一线性化载体中了解更多信息
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货号 A14606
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GeneArt™ 无缝克隆和组装酶混合物可在单次 30 分钟室温反应中将由任一序列组成的 1 至 4 个 PCR 片段同时定向克隆至任一线性化载体中。GeneArt™ 无缝酶混合物是创建长达 13 kb 的构建体的经济选择,可选择高通量组装。

效率:可针对大片段选择预克隆以提高克隆效率
快速容易:可在单个载体(长达 13 kb)中克隆 DNA 片段(含有您选择的序列);无需限制性酶切、连接或重组位点
免费工具:使用我们可逐步引导您完成计划的免费网络工具,通过电脑模拟设计您的最终构建体和 DNA 寡核苷酸
载体灵活性:使用我们的线性载体或您选择的载体

对于预先存在的 DNA 元件太长以致无法通过 PCR 进行扩增的克隆以及最终分子长达 40 Kb 的情况,请考虑使用 GeneArt™ 无缝 PLUS 克隆和组装试剂盒(仅 1–4 个 DNA 片段);对于最终分子大于 110 kb 的情况,请考虑使用 GeneArt™ 高阶遗传组装系统

简单快速的克隆创建
GeneArt™ 无缝克隆是一种简单的两步流程,包括体外组装以及随后的转化过程。该酶混合物使用专有酶/缓冲液混合物组装 DNA 片段,无额外序列或痕迹(“无缝”)。通过使用定制 DNA 寡核苷酸(通过我们的免费网络工具进行设计)进行 PCR 扩增即可轻易掺入末端同源性(如果需要)。

高效、灵活和精确的克隆
克隆成功与否与插入片段序列和载体类型无关,您可以设计并添加几乎所有所需的序列或序列组合至任何质粒中,前提是质粒可通过限制性内切酶消化或者 PCR 进行线性化。从反应中获得的环形克隆仅包含您的原始载体序列、插入片段和指定的同源性,无无关核苷酸插入。

电脑模拟克隆设计支持
GeneArt™ 无缝克隆中的一个关键步骤是具有适当同源性和间距的片段和寡核苷酸的正确设计,以帮助确保克隆成功组装。为简化和加速设计流程,我们提供了一种免费在线工具(用于无缝或高阶组装和突变的 GeneArt™ 设计工具)来帮助您通过电脑模拟设计实验。该工具可指导用户完成构建体设计,包括片段导入、次序和方向;检查同源性区域和潜在设计问题;如有需要,可创建用于预克隆的引物或将片段间末端同源性结合在一起;并生成最终构建体图谱文件和 Genbank 规格的序列以下载或导入 Vector NTI™ 软件。

应用
GeneArt™ 无缝克隆和组装酶混合物设计用于在多种分子生物学和合成生物学应用以及其他领域中进行克隆和 DNA 组装。该产品可用于创建带有可替换部分的模块化表达载体,还可用于执行在其他方面可能涉及多个步骤的多种任务。使用混合物构建融合蛋白;删除、替换或添加 DNA 元件,如现有载体中的限制性位点;执行多种其他需要处理基因序列的技术。

仅供研究使用。不得用于人或动物的治疗或诊断用途。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
克隆方法无缝克隆
适用于(应用)克隆
片段数多达 4 个片段
数量20 Reactions
规格总计 13 kb(载体加所有插入片段)
载体pUC19L 线性化
工作流程步骤DNA 组装
产品规格试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存
1 瓶 GeneArt 酶混合物 (2X)
pUC19L 线性化载体
对照插入片段

常见问题解答 (FAQ)

使用GeneArt Seamless克隆和组装试剂盒时,很大数量的转化子包含错误的插入片段。您能提供一些解决这一问题的建议吗?

使用凝胶电泳检查您的PCR产物。您可能得到了多个PCR产物,导致在您的载体中连入了错误的插入片段。对PCR产物进行凝胶纯化能帮助解决这一问题。

使用GeneArt Seamless克隆和组装试剂盒时,很大数量的转化子没有包含插入片段。您能提供一些解决这一问题的建议吗?

检查以确保克隆载体的线性化是完全的。另外,GeneArt酶混合物加入的顺序对实验很关键 - 请最后加入酶混合物。最后,检查反应的孵育时间是否是推荐的时间。

使用GeneArt Seamless克隆和组装试剂盒时,我在转化DNA插入片段后没有得到克隆,但是使用对照组装反应的转化却成功了。您能提供一些解决这一问题的建议吗?

请参考下面的建议:

•检查PCR产物的纯度。
•确保片段末端之间存在所需的末端同源序列。
•DNA末端可能在制备过程中被破坏了(例如暴露于UV照射),请减少DNA暴露于UV/EtBr的时间。
•检查DNA插入片段和载体之间的比例(插入片段:载体摩尔比2:1)。
•确保正确操作GeneArt 酶混合物。该酶是温度敏感的。请在使用后立刻放回存储位置。不要将其放在室温或冰上过长时间。

将4个DNA片段克隆进一个载体——应该使用GeneArt Seamless克隆和组装试剂盒还是GeneArt Seamless克隆和组装(PLUS)试剂盒,或是GeneArt High-Order遗传组装试剂盒?

如果这些片段全部小于5 kb且分子的总长度小于13 kb,那么我们建议使用GeneArt Seamless克隆和组装(PLUS)试剂盒。如果您组装的片段没有末端同源性,或者由于太大而不能进行PCR扩增,或者组装后的分子大于13 kb,那么我们推荐使用GeneArt High-Order组装系统。总体来说,High-Order 系统可以组装更多片段,进行片段编辑,以及进行寡核苷酸拼接并且效率更高。但是,它的组装是在体内(酵母中)进行并且得到最终质粒需要更长的时间,因为酵母的生长周期比E. coli长。请使用这一表格(https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/cloning/seamless-cloning-and-genetic-assembly.html)来选择最适合您应用的GeneArt Seamless克隆和组装试剂盒。

我正在使用GeneArt Seamless克隆和组装试剂盒时发现我的引物不小心仅设计了14 bp的重叠区域。这是可以接受的吗?

这不会是一个问题。比推荐的长度少几个碱基的重叠区域仍然会在反应中正常发挥作用。但是,获得最佳结果的重叠区域是15 bp。