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CorrectASE是一种酶,它可以消除由寡核苷酸合成错误导致的错配,导致合成基因或片段的错配减少3 - 10倍。它作为一个独立的产品出售(货号A14973),或作为GeneArt基因合成试剂盒(货号A14971)的一部分。
根据实验方案,寡核苷酸储存液应该用1X TE缓冲液配制,其终浓度为100 μM。下一行建议将浓度为10 μM的引物各取5μl加到一起。根据研发同事的反馈,操作手册这样写是因为他们通常将冻干的寡核苷酸配制成浓度为100 μM的储液(由于EP管体积的原因)。但是你做实验时可能会需要用到浓度为0.15 μM的引物pool。这时,你可以将储液稀释到10 μM或者将引物pool按1:10稀释。
使用CorrectASE酶过度酶切可能会导致DNA模板降解。 确保反应不超过60分钟。同时,确保在PCR步骤前反应物保持冰浴,否则反应物将有可能被CorrectASE酶过度酶切。
请发送电子邮件到geneartsupport@lifetech.com对有错误的地方进行说明。请同时提供项目编号及载体编号(ID),以便我们将问题反馈给质检部门做进一步调查。
我们在生产过程中会采用不同的菌种,例如Top10或DH5α。一般情况下,我们用dam+菌种进行培养。因此,你可能发现酶切受到抑制,因为Xba1对dam甲基化敏感。