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人体ES细胞一般可通过以下方法进行鉴定:经典型的形态(它们以致密的细胞团形式生长 生长为紧密聚集的小型细胞团,细胞小并具有高核质比);表面标志物的表达;干细胞特异性基因表达的RT-PCR检测(如Oct3/4,Sox2和Nanog);碱性磷酸酶染色和端粒酶活性检测。最为常用的人ES细胞特异性表面标志物包括发育阶段特异性的胚胎抗原SSEA-3和SSEA-4。其它的ES细胞特异性的其它表面抗原还包括TRA-1-60和TRA-1-81。(Science 282:1145 (1998))。
人胚胎干细胞源自人类囊胚内细胞团, 是通过使用兔抗血清检测BeWO细胞(人滋养层细胞系)抗血清的通过免疫外科法手段来进行分离的(Science 282:1145 (1998))。
胚胎干(ES)细胞是源自早期哺乳动物胚胎的细胞,能够在体外进行无限的未分化增殖,同时保留分化为各类成体组织(包括生殖细胞)的潜能。ES细胞的多能性通常在体外通过以下方法来证明:将ES细胞诱导分化为类拟胚体,并以谱系特异性的标志物检测三个体胚层(内胚层,中胚层和外胚层)中分化细胞的谱系特异性标志物分化情况,或将这些细胞注射到免疫缺陷型小鼠中,以检测畸胎瘤中产生的细胞类型。
是的,这是正常情况。我们在产品开发过程中也见到了类似情形。请在预包被处理后吸去Geltrex 溶液,再按常规操作加入细胞。我们使用即用型Geltrex 基质预先包被的成品平板来培养H9人体胚胎干细胞,在进执行预包被步骤时有过类似发现。
是的,请尝试使用不同稀释浓度的基质来包被平板。一些客户使用1:100的稀释浓度获得了更好的结果。最佳稀释浓度取决于所使用的细胞系。