CytoTune™-iPS 2.0 仙台病毒重编程试剂盒

丙戊酸通常被认为能够提升慢病毒等整合性病毒系统的重编程效果。但其对CytoTune试剂所介导的重编程似乎没有促进效果，因为仙台病毒是一种非整合性的RNA病毒。

CytoTune-iPS 2.0仙台病毒重编程试剂盒包含了温度敏感的c-Myc和KOS变异的载体，能够更方便地实现清除操作。如需清除c-Myc和 KOS，请将iPSC细胞在38–39°C孵育5天。用户需要注意iPSC细胞的敏感性，因此我们只推荐对传代10次以上仍含有仙台病毒，且已通过RT-PCR技术确认过您的细胞中不含 Klf4 载体（这个载体不含温度敏感性的突变）的iPSC细胞系执行升温操作，这样您就可通过升温来去除c-Myc和 KOS基因了。

基于您所用细胞类型，可预期在转导后24-48小时观察到某种程度的细胞毒性，50%以上的细胞都可能受到影响。这表明细胞接受了大量病毒，并表达外源基因所致。我们推荐您按照实验方案中的步骤进行持续培养。

TaqMan仙台病毒基因检测Assay和CytoTune 2.0和CytoTune 2.1版本都兼容，但有一个例外。CytoTune 2.0试剂盒包含一个表达c-Myc的载体，而CytoTune 2.1试剂盒包含的是表达L-Myc的载体。因此，对每种试剂盒应使用与之相对应的Assay(例如，SEVCMYC用于CytoTune 2.0, SEVLMYC用于CytoTune 2.1)。所有其它Assay对这两种试剂盒都是兼容的。

我们没有用于终点法RT-PCR的这种引物。然而，我们确实为每一个外源性重编程基因提供了经过验证的TaqMan基因表达Assay (https://www.thermofisher.com/order/genome-database/browse/gene-expression/keyword/sendai+taqman)。这些Assay被设计用来专门检测仙台病毒载体上发现的外源基因的表达，不会与这些基因的内源性表达发生交叉反应。此外，这些Assay也可被用于检测每种CytoTune仙台病毒载体的存在，以确定这些载体是否从已建立的ipsc中清除了。