GeneArt™ CRISPR 核酸酶载体(CD4 富集)试剂盒(含感受态细胞)
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Invitrogen™

GeneArt™ CRISPR 核酸酶载体(CD4 富集)试剂盒(含感受态细胞)

GeneArt™ CRISPR 核酸酶载体(CD4 富集)试剂盒是一种用于在含 CD4 报告基因的哺乳动物细胞中表达 CRISPR/Cas9 基因组编辑所需的功能组分的载体系统了解更多信息
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货号 A21177
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10 reactions
GeneArt™ CRISPR 核酸酶载体(CD4 富集)试剂盒是一种用于在含 CD4 报告基因的哺乳动物细胞中表达 CRISPR/Cas9 基因组编辑所需的功能组分的载体系统。CD4 报告基因可进行基于微珠的富集,这是使用 Dynabeads™ CD4 磁珠对 Cas9 & CRISPR 表达细胞进行磁珠法分选/富集的一种选择。也可以使用抗 CD4 荧光抗体追踪转染效率。线性化的 GeneArt™ CRISPR 核酸酶载体提供了一种快速高效的方法,可将编码代表所需靶标的 crRNA 的双链寡核苷酸克隆到表达盒中,从而实现对 Cas9 核酸酶进行序列特异性靶向。该试剂盒版本包括 OneShot™ TOP10 感受态细胞。还提供不含感受态细胞的版本(货号 A21175)。

含感受态细胞的 GeneArt™ CRISPR 核酸酶载体系统提供:

•易于设计的基因组工程系统
• 价格实惠、即用型克隆载体
•富集难以转染或难以修饰的细胞系
•包括感受态细胞以增加便利性和极高克隆效率

用于基于 CRISPR 的基因组编辑的一体式载体系统
GeneArt™ CRISPR 核酸酶载体试剂盒提供简单、即用型、一体式表达载体系统,包括 Cas9 核酸酶表达盒和向导 RNA (gRNA) 克隆盒,用于快速高效克隆编码靶向性 CRISPR RNA (crRNA) 的 DNA。该系统使您能够以序列特异性的方式从单个质粒编辑和工程化所选的基因组位点。采用快速且易于使用的 GeneArt™ CRISPR 载体确定相关靶标后,可以采用 GeneArt™ Precision TAL 来精确创建生物相关突变,具有高特异性和低脱靶效应。

您需要 CRISPR gRNA 设计方面的帮助?
我们的新 CRISPR 搜索和设计工具使您可以搜索我们的人和小鼠基因数据库中600,000多种预先设计的 CRISPR gRNA,或者分析您感兴趣的序列以使用我们的专有算法从头进行 gRNA 设计。CRISPR 序列针对基因敲除进行了优化,并靶向每个基因的前三个转录外显子。搜索结果包括含 PAM 位点的前 6 个 CRISPR 序列、含 gRNA 结合位点的外显子图,以及每个 CRISPR 序列的潜在脱靶结合位点。该工具将为您首选的 CRISPR-Cas9 产品设计正确的 gRNA 规格,包括您的 GeneArt™ CRISPR 核酸酶载体的寡核苷酸。立即开始设计 >

资源
展示方案:使用 CRISPR-Cas9 的工程干细胞
展示方案:用小鼠和斑马鱼胚胎进行 CRISPR-Cas9 显微注射
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
克隆方法限制性内切酶/MCS
产品规格试剂盒
反应次数10 次反应
突出端3' 突出端
产品线GeneArt
产品类型Crispr 核酸酶载体(CD4 富集)试剂盒
促进剂U6、CMV
蛋白标记CD4 融合
数量10 reactions
报告基因CD4
原始材料寡核苷酸 (DNA)
足够用于10 次反应
技术CRISPR-Cas9
检测方法引物-探针
适用于(应用)基因表达, 克隆
形式液体
反应速度快速
Unit SizeEach
内容与储存
•CRISPR CD4 核酸酶载体,线性化
• 10X 寡核苷酸退火缓冲液
• 无 DNase/RNase 水
• 5X 连接缓冲液
• T4 DNA 连接酶
• U6 正向测序引物
•对照双链寡核苷酸
在 -5 至 -30°C 下储存上述物质。

•OneShot™ TOP10 化学感受态细胞
在 -80°C 下储存。

常见问题解答 (FAQ)

相比CRISPR系统,TAL基因组编辑技术的优点是什么?

Invitrogen GeneArt Precision TALs除了可用于基因删除、基因下调和整合之外,还可以用于基因激活。此外,该系统是基于一个蛋白-DNA系统,而CRISPR是基于一个RNA-DNA系统。TALs效应子可以用于靶向包括哺乳动物、细菌、酵母、植物、昆虫、干细胞以及斑马鱼在内的任何细胞的任何基因。最后,使用TAL系统时脱靶效应更低。请参考下列论文(http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S016816561500200X),文中作者比较了TALEs技术和CRISPR技术。

在我的筛选平板上仅出现很少的氨苄抗性菌落。可能的原因是什么?有什么建议吗?

请看下面的原因和解决方案:

- 单链(ss)寡核苷酸设计不正确:确保每个ss寡核苷酸均在3’末端包含用于克隆到GeneArt CRISPR核酸酶载体上的5个核苷酸,比如:正义链3’末端包含GTTTT,反义链3’末端包含CGGTG。
- 双链(ds)寡核苷酸被降解:将5 nM ds寡核苷酸存储于1X寡核苷酸退火缓冲液中,避免反复冻融;将5 nM ds寡核苷酸储存液分装并保存于–20°C。
- 寡核苷酸退火反应效率过低:确保根据实验说明进行退火反应。
- 如果环境温度>25°C,则需要在25°C温箱内进行退火反应。

我在对载体进行测序以确认插入片段已插入并且序列正确时遇到一些问题。有什么建议吗?

请看下列建议:

•使用高质量的、纯化的质粒DNA进行测序。我们建议使用Invitrogen PureLink HQ Mini质粒纯化试剂盒纯化DNA。向测序反应中加入DMSO至终浓度5%。
•提高用于测序反应的模板量(可提高至通常浓度的两倍)。
•在测序反应中使用7:1摩尔比的dITP:dGTP。

怎样才能提高效率?

有一些方法可以帮助提高效率,例如,加入抗生素选择和/或使用流式细胞仪分选以富集被转染的细胞都会对提高效率有所帮助。

在我的目标区域附近没有PAM NGG序列。我该怎么办?

很不幸,PAM序列对于CRISPR基因编辑是必须的。但是,如果没有PAM序列可用时,您可以使用我们的Invitrogen GeneArt Precision TAL效应因子核酸酶系统。

引用和文献 (1)

引用和文献
Abstract
Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection.
Authors:Liang X, Potter J, Kumar S, Zou Y, Quintanilla R, Sridharan M, Carte J, Chen W, Roark N, Ranganathan S, Ravinder N, Chesnut JD,
Journal:
PubMed ID:26003884
'CRISPR-Cas9 systems provide a platform for high efficiency genome editing that are enabling innovative applications of mammalian cell engineering. However, the delivery of Cas9 and synthesis of guide RNA (gRNA) remain as steps that can limit overall efficiency and ease of use. Here we describe methods for rapid synthesis of ... More