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TALs或者TALENs是类似于转录激活因子的效应核酸酶蛋白,它们是天然存在的转录激活因子,由Xanthomonas spp.分泌到其植物宿主体内。 Invitrogen GeneArt TALs来源于细菌Xathomonas产生的TAL效应子,其DNA结合结构域包含不同数目的氨基酸重复序列。每个重复包含33-35个氨基酸并可识别一个单DNA碱基对。对DNA的识别是通过两个高变异氨基酸残基实现的,它们分别位于每个重复序列的第12和13位,被称为重复可变双残基(repeat-variable di-residues, RVD)。TAL效应子重复序列可以通过模块的形式组装,通过改变RVD而生成一个识别特定目标DNA序列的TAL蛋白。
我们在TAL MCS入门载体中提供一个多克隆位点替代效应子结构域。这一设计使得您可以向其中插入任何蛋白编码序列,并且可以根据序列特异性将您得到的TAL蛋白靶向到基因组的任何位置。我们还提供基因合成服务以生成任何您没有模板的效应子结构域。
虽然我们的Invitrogen GeneArt Precision TALs要求在5’末端有一个T并且在正向和反向TAL效应子之间有13–18 bp的间隔序列以便Fok1核酸酶进行正常配对,但是Invitrogen GeneArt PerfectMatch TALs允许靶向基因组任何序列并且消除了5’末端要求为T的限制。另外,两个效应子之间的最佳间隔序列为 15–16 bp。
19 bp结合结构域对于核酸酶而言效果更好。结合位点不需要是相同长度;但是对于核酸酶而言19 bp结合结构域效果最好。
我们观察到只要有3 bp的错配便会影响TAL的结合。我们建议设计序列和结合位点之间精确匹配。如果您需要获得设计上的帮助,请发邮件到geneartsupport@lifetech.com.