ExpiFectamine™ CHO 转染试剂盒

ExpiFectamine CHO 转染试剂、ExpiFectamine CHO 增强剂和 ExpiCHO 养料经过优化，可互相配合，达到最高的蛋白表达水平，而且为了方便使用，三者以一套试剂盒的形式提供。ExpiFectamine CHO 转染试剂对高密度培养的细胞有很高的转染效率，优于任何其他转染试剂。与使用聚乙烯亚胺 (PEI) 作为转染试剂相比，使用 ExpiCHO试剂盒按照说明书操作可以获得 30 倍高的表达水平，同时这两种方法中使用减少 50% 的 DNA 用量。

对于大多数测试过的抗体，1:1 的比例最适合 ExpiCHO 系统。重链/轻链质粒最佳比例取决于二者共转染到同一细胞后的表达速度，有时则要取决于具体的抗体。我们建议按此比例开始，然后针对具体的分子进行必要的调整。我们建议首先将重链和轻链亚基分别克隆到 InvitrogenpcDNA3.4 TOPO 载体中，然后再优化这两种质粒的比例。我们也测试了一个质粒同时包含重链和轻链基因的方法，结果与前一种方法类似，因此最终的答案要取决于用户的经验和偏好。

ExpiFectamine CHO 是一种高效的转染试剂，可以使用显著较低的质粒 DNA 用量进行蛋白表达。较高浓度的 DNA 会对细胞产生更大的应激。试剂盒操作规程中规定的 ExpiFectamine CHO 试剂体积对应的质粒 DNA使用浓度为 0.5–0.8 μg/m；如果 使用比这少的DNA ，则应按比例相应减少 ExpiFectamine CHO 试剂的用量，以获得最佳效果。对大多数蛋白，建议使用 0.6–0.8 μg/mL 的浓度。对于一些易于聚集或者难以表达的蛋白，更低的 DNA 用量可能有利于蛋白的表达。

如果不能立即将稀释的 ExpiFectamine CHO 试剂加入到稀释的质粒 DNA 中，我们建议您按照试剂盒操作规程将质粒DNA 稀释到将要使用的总复合物体积 (即：正常情况下稀释ExpiFectamine CHO 试剂和质粒 DNA 所需的 OptiPro 培养基总量)，然后将未稀释的 ExpiFectamine CHO 试剂直接加到稀释的质粒 DNA 中。轻轻吹打 1–2 次并且/或者颠倒容器进行混匀。该方法适用于自动化操作或者小规模转染，因为上述情况下不可能或者不方便稀释后立即将 ExpiFectamine CHO 试剂加到质粒 DNA 中。

为了获得最佳效果，建议按以下方法进行 DNA 复合物形成：

1.用低温 Gibco OptiPro 培养基稀释质粒 DNA。
2.使用时，用低温 OptiPro 培养基稀释 ExpiFectamine CHO试剂，然后立即将其加入到稀释的质粒 DNA 中。
3.轻轻吹打 1–2 次并且/或者颠倒容器进行混匀；不要涡旋振荡或剧烈吹打。
4.复合物形成时间应在 30 秒至 5 分钟范围内。

避免延长存放稀释后的 ExpiFectamine CHO 试剂或者ExpiFectamine CHO 试剂-质粒 DNA 复合物反应体系。